POTENCIALIDADES DE MORUS ALBA PARA LA SALUD Dra

POTENCIALIDADES DE MORUS ALBA PARA LA SALUD. Dra. Maykelis Díaz Solares Estación Experimental Indio Hatuey Noviembre 2010 I Taller Internacional “La Sericultura en el contexto del desarrollo local y regional”

El reino vegetal es un reservorio extraordinario de metabolitos secundarios USOS MEDICINALES DE LA MORERA Prevención de la diabetes Terapia contra el cáncer Neuroprotección (para detener hemorragias cerebrales) Prevención de hígado graso (reducir el colesterol) Efectos inmunológicos Antioxidante Beneficiosa para la piel Efecto en el sistema nervioso central Diurético Combatir el acné Aliviar la fiebre Bajar la presión arterial Como emoliente

FITOQUÍMICA

Tamizaje fitoquímico. Preparación de los extractos. Se utilizó la morera seca y molida para realizar 3 extractos de diferente polaridad: primero n-hexano, seguido de etanol y por último agua. La extracción se llevó a cabo a partir de 2 g de material vegetal con 20 m. L de n-hexano, 20 m. L de etanol y 20 m. L de agua, respectivamente. Se determinó en cada tipo de extracto lo siguiente: n-hexano: alcaloides, triterpenos y esteroides, quinonas, agrupamiento lactónico. Etanol: Agrupamiento lactónico, fenoles y taninos. Agua: flavonoides, fenoles y taninos, triterpenos.

Tamizaje fitoquímico. Extracto n-hexano. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Triterpenos y esteroides +++ +++ +++ Quinonas - - - - - Agrupamiento lactónico +++ ++ +++ Alcaloides - - - - - Determinación 1 - Indonesia 2 - IZ-13/6 3 - IZ-15/7 4 - Acorazonada 5 - Criolla 6 - IZ-40 7 - Tigreada 8 - IZ-64 9 - IZ-56/4 10 - Cubana Todas las muestras estudiadas presentaban triterpenos y esteroides en abundancia. En cuanto a los agrupamientos lactónicos también se encontraron en todas las variedades de morera estudiadas. Las quinonas y los alcaloides no tenían presencia alguna en dichas muestras.

Tamizaje fitoquímico. Extracto etanólico. Determinación 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Agrupamientos lactónicos + + + + + Fenoles y/o taninos ++ +++ +++ 1 - Indonesia 2 - IZ-13/6 3 - IZ-15/7 4 - Acorazonada 5 - Criolla 6 - IZ-40 7 - Tigreada 8 - IZ-64 9 - IZ-56/4 10 - Cubana En el extracto etanólico hay presencia en todas las variedades de fenoles y/o taninos mientras que hay poca abundancia de agrupamientos lactónicos.

Tamizaje fitoquímico. Extracto acuoso. Determinación 1 Fenoles y/o taninos 4 5 6 7 8 9 10 +++ +++ +++ Flavonoides - - - - - Triterpenos y esteroides + +++ + + 1 - Indonesia 2 - IZ-13/6 3 - IZ-15/7 4 - Acorazonada 5 - Criolla 6 - IZ-40 7 - Tigreada 8 - IZ-64 9 - IZ-56/4 10 - Cubana 2 3 En el extracto acuoso, podemos observar que hay abundantes fenoles y taninos en todas las variedades de morera y en la variedad IZ 13/6 se aprecian mayor presencia de triterpenos y esteroides. En este extracto los flavonoides se determinaron utilizando alcohol alílico en vez de alcohol amílico que es lo recomendado, esta puede ser la causa de la no detección de dicho metabolito.

ANTIOXIDANTES ENZIMÁTICOS

El sistema antioxidante de las plantas incluye un conjunto amplio de compuestos de naturaleza proteica, entre las que se encuentran las enzimas antioxidantes. CATALASAS Y PEROXIDASAS enzimas primarias envueltas en la eliminación directa de las especies reactivas del oxígeno. enzimas más importantes por la capacidad de transformar el compuesto prooxidante peróxido de hidrógeno, en agua y oxígeno molecular.

b -6 -6 13 Catalasa-tallo a 13 Iz Iz Iz 6 13 - 9 15 - 40 Catalasa-hojas Iz d -9 a -9 d 15 Iz 64 cd 15 Iz 40 Iz 4 56 - f Iz 40 Iz 64 Iz cd Iz -4 56 b 64 Iz ub an a f Iz -4 cd 56 a C ea da gr Ti lla C rio f Iz a an d ub an g C da ea gr Ti lla rio C ia ad a zo n ra Ac o do ne s In Actividad catalasa (U/mg) b C ub bc re ad a lla rio b C a ad a on az or Ac g Ti g a 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 na da az o or si ne si In do Actividad catalasa (U/mg) 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 Ac ne do In Actividad catalasa (U/mg) CATALASA 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 a de ef g Variedades b c d e f Variedades Catalasa-raíz bc bc Variedades

-6 -6 cd 13 Iz 13 -6 15 -9 cd 13 Iz -9 Iz bc Iz -9 cd c 15 b 15 Iz bc Iz b 40 64 f 40 bc 40 Iz Iz 56 -4 dc Iz Iz Iz ub an a bc 64 cd 64 -4 3 Iz 56 a C a lla rio gr ea d Ti C Guaiacol peroxidasa-hojas a abc Iz -4 b 56 Iz an 5 Iz a de ub C da 2 an da 6 C ub ea ea b gr gr Ti lla rio C a ad on az a si do ne si Ac a or az on ad a In Actividad guaiacol peroxidas (U/mg) ab Ti lla or Ac b C rio a 3. 5 3 2. 5 2 1. 5 1 0. 5 0 ad on a si ne do In Actividad guaiacol peroxidasa (U/mg) 4 az or Ac do ne In Actividad guaiacol peroxidasa (U/mg) PEROXIDASA 14 12 10 8 6 4 2 0 ef de Variedades Guaiacol peroxidasa-tallo a a bc d 1 0 Variedades a Guaiacol peroxidasa-raíz b e e Variedades

ESTUDIO DE TOXICIDAD ¿?

Para la prueba de toxicidad se utilizó la variedad Tigreada. Ratas Wistar macho entre 200 y 250 g se organizaron aleatoriamente en dos grupos a los cuales se les fueron administradas por vía oral las siguientes soluciones: Grupo I (control): 1 ml de suero fisiológico. Grupo II: 1 ml de extracto fresco de hoja. Los animales fueron monitoreados a intervalos regulares durante 48 horas. Las ratas fueron mantenidas en un régimen de agua y alimentación ad libitum durante el ensayo. RE SU LT AD OS NO síntomas de hiperactividad o sedancia durante el tiempo de monitoreo Comportamiento habitual en correspondencia con el horario del día NO principio de convulsiones o alteraciones en el ritmo respiratorio o cardíaco Mantuvieron régimen de alimentación e hidratación similar al control

PREVENCIÓN DE ÚLCERAS GÁSTRICAS PROVOCADAS POR ETANOL

APLICACIÓN DE DOS EXTRACTOS DE HOJA DE MORUS ALBA EN LA PREVENCIÓN DE LESIONES GÁSTRICAS INDUCIDAS POR ETANOL. Extractos vegetales MORERA FRESCA MACERACIÓN EN MORTERO CON NITRÓGENO LÍQUIDO RESUSPENDER EN PBS A 500 MG/ML MORERA SECADO EN ESTUFA A 800 C, 72 HORAS EXTRACCIÓN CON ETANOL AL 95 % EN UN EQUIPO SOXHLET. ROTOEVAPORAR RESUSPENDER EN PBS A 500 MG/ML

Material animal Las ratas Winstar (machos) de 250 -300 g suministradas por el CENPALAB las cuales fueron mantenidas con pienso específico y agua hasta las 12 horas antes del experimento que se les dejó en ayunas.

Inducción de lesiones gástricas. La inducción de las lesiones gástricas se realizó introduciendo una sonda gástrica por la boca del animal. Por esa sonda se suministró el extracto de morera (100 mg/ml disueltos en PBS) y el etanol al 80 % para provocar las lesiones a diferentes grupos de animales.

Para el ensayo de prevención de úlceras gástricas provocadas por etanol se utilizaron 4 grupos de 6 animales cada uno. Tratamientos aplicados a los diferentes grupos de animales experimentales. Grupo 0 horas 2 horas I (control negativo) PBS II (control positivo) PBS Etanol 80 % III (extracto morera fresca) Morera fresca Etanol 80 % IV (extracto morera seca) Morera seca Etanol 80 %

El total de lesiones gástricas fue medido teniendo en cuenta que cada 5 hemorragias petequiales representaban 1 mm de úlcera. Hemorragias de los estómagos Grupos I (control negativo) II (control positivo) III (extracto morera fresca) IV (extracto morera seca)

ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA ¿edema?

La inflamación es una respuesta biológica compleja de los tejidos vasculares, debido a daños causados por patógenos, sustancias irritantes y daños mecánicos entre otros factores. Los organismos en respuesta a tales estímulos desarrollan varios eventos en función de eliminar el daño e inicia un proceso de saneamiento en los tejidos afectados.

Determinación de la actividad antiinflamatoria de extractos de hojas de morera en un modelo de inflamación inducido por carragenina Este método se basa en determinar la inhibición del edema de la pata inducido por carragenina en ratas tratadas con sustancias antiinflamatorias. Se utilizaron ratas Winstar machos de aproximadamente 250 g de peso corporal, las cuales fueron seleccionadas aleatoriamente en 5 grupos de 6 animales cada uno.

(%) La determinación de la dosis máxima con la cual se obtiene el mayor efecto antiinflamatorio para los distintos extractos fue de 400 mg/kg (peso vivo) Inhibición del edema 70 60 50 40 30 20 10 0 200 400 800 Dosis (mg/Kg) Hoja Tallo Raíz Indometacina

Los resultados de la actividad antiinflamatoria con los diferentes extractos de morera a una dosis de 400 mg/kg a las cuatro horas de ensayo, mostraron un aumento de la inhibición del edema con relación al control, donde a las ratas les fueron administradas solución salina. Entre los extractos las raíces presentaron los mayores valores (40, 2 %) seguido del extracto acuoso de hojas (22, 8 %), ambos inferiores a la indometacina utilizada como control positivo en el experimento. 100 Inhibición del edema (%) a 80 60 ab 40 bc bc 20 c 0 Control Hoja Corteza Raiz Indometacina

Modelo de pleuresía inducida por carragenina en ratas. Se utilizaron 6 ratas Winstar machos por cada grupo de estudio, a las que se les administró por vía oral 1 ml de extractos de hoja, corteza y raíz (400 mg/Kg). Al cabo de una hora los animales fueron anestesiados en atmósfera de éter, se afeita la piel debajo de la zona intercostal derecha en una extensión aproximada de 1, 5 cm, en condiciones de esterilidad se hace una incisión, se decolocan los tejidos hasta llegar a los músculos intercostales y se inyectan en el espacio interpleural 0, 2 ml de una solución de carragenina al 1 % en suero fisiológico. A continuación se sutura la piel y los animales son mantenidos en cajas individuales.

Por el método de la inhibición del exudado pleural, las hojas mostraron un mejor efecto antiinflamatorio (43, 3 % inhibición) que los extractos de raíz (24, 6 % inhibición), mientras que la corteza no mostró actividad antiinflamatoria. 100 Inhibición del edema (%) 80 60 40 20 0 Control Hoja Corteza Raíz Indometacina

Determinación de la concentración de proteínas totales en los exudados pleurales de ratas tratadas con diferentes extractos frescos de la variedad Tigreada. a ab bc c d Control I: Indometacina Control II: Carragenina d Control III: Placebo

La actividad antiinflamatoria encontrada puede estar relacionada con las propiedades antioxidantes de la morera, ya que muchas de las enfermedades en las que se encuentra involucrado el estrés oxidativo, están vinculadas con la respuesta inflamatoria.

CONCLUSIONES ü ü ü El estudio fitoquímico mostró cantidades considerables de triterpenos y esteroides, así como de fenoles y de taninos en los extractos evaluados; mientras que no fueron detectados quinonas ni alcaloides. Se detectaron diferencias significativas entre la actividad específica de ambas enzimas en los diferentes órganos evaluados y entre las variedades e híbridos; reportándose los mayores valores en hojas, tallos y raíces en orden decreciente. En el ensayo de toxicidad no se observaron síntomas clínicos importantes como mortalidad, convulsiones, alteraciones en el ritmo cardiaco o respiratorio. De los métodos de extracción utilizados el extracto fresco fue el que presentó mayor inhibición de lesiones gástricas provocadas por la administración de etanol. Se observó actividad antiinflamatoria con los extractos de hoja y raíz. Se sugiere el empleo de estos extractos en modelos biológicos para la identificación de propiedades medicinales, en particular las asociadas al estrés oxidativo.

Organismo financista: MINISTERIO DE EDUCACIÓN SUPERIOR DE CUBA Participantes: EEPF “Indio Hatuey” Dra. Maykelis Díaz Solares Ing. Yudit Lugo Morales Lic. Marlene Prieto Abreu Universidad de Matanzas “Camilo Cienfuegos” Dra. Aymara Valdivia Ávila Lic. Yunel Pérez Hernández Lic. Yanet Cazaña Martínez