Polymerase Chain Reaction The three steps of PCR

Polymerase Chain Reaction The three steps of PCR Step 1. Denaturation : 열을 가하면 DNA의 이중가닥의 수소결합이 파 괴되어 단일가닥으로 분리됩니다. Step 2. Annealing : DNA primer가 DNA 에 결합하는 단계. Step 3. Extension : DNA polymerase 에 의해 DNA 합성이 일어나는 단 계. (유의사항 : Extension time의 설정은 증폭하고자 하는 product 의 size와 사용하는 효소에 따라 달라진다. ) Herculase II: ~1 kb(30 s) Taq polymerase: ~1 kb (1 min) (25~30 cycle)

PCR mediated mutagenesis 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’

Procedure : Primary PCR • Ingredient for PCR reaction (Primary PCR) Component Quantity per reaction Targets 1 -10 kb Distilled water 35. 5 ul 5 x Herculase II reaction buffer 10 ul d. NTP mix 0. 5 ul DNA template 1 ul Primer A, B /C, D Each 1 ul/tube Herculase II fusion DNA polymerase 1 ul Total reaction volume 50 ul • Primary PCR condition Temp. (℃) Time 95 5 min 95 30 sec 55 30 sec 72 5 min 30 cycles

• Gel electrophoresis result