PENGENCERAN SEMEN Fungsi Pengenceran semen Memperbanyak volume Memberi

PENGENCERAN SEMEN

Fungsi Pengenceran semen • Memperbanyak volume • Memberi media yang cocok untuk hidup spermatozoa • Perlindungan (Krioprotektan)

Perlu dihindari • • • Panas yang berlebihan Bahan kimia yang toxic Berhubungan dengan udara luar Sinar matahari langsung Goncangan

Fungsi pengencer • • Memperbanyak volume Pelindung spermatozoa Sumber nutrisi bakteriostatik

Mengandung sumber energi • Sumber energi yang digunakan adalah gula sederhana: - Fruktosa - Glukosa - Levulosa - Mannosa - Raffinosa - Lactose dll

Bersifat isotonis • Mempunyai tekanan osmose yang sama antara medium dengan spermatozoa • Tekanan Osmose medium Tinggi (Kental) Cairan dalam sel akan keluar • Tekanan Osmose medium Rendah (Encer) Cairan dari luar akan masuk ke dalam sel.

Mengandung Buffer • Atau disebut larutan penyangga, yaitu suatu bahan yang berfungsi agar p. H dalam keadaan netral. • Bila terlalu asam atau basa, maka sel akan mati • Bahan yg sering digunakan adalah Na H 2 CO 3 , Na H 2 PO 4

Mengandung Antibiotik • Dosis yang digunakan adalah dosis pecegahan (bukan pengobatan) • Sebab prinsipnya antibiotik adalah merusak membran mikroorganisme, klu terlalu tinggi akan mematikan spermatozoa • Penisilin dan streptomisin

Syarat utama pengencer mengandung 1. Energi (Gula sederhana: Fruktosa, Glucosa, dll). 2. Buffer/Penyangga ( p. H sekitar 6 - 8) (Tris, Na 2 HCO 3, Na 2 H PO 4 dll). 3. Isotonis (tekanan osmose di dalam sel sama dengan diluar sel). 4. Mineral

5. Antibiotik (Dosis pencegahan). 6. Tidak toxic 7. Murah & mudah disiapkan 8. Memberikan kemungkinan untuk uji kualitas 9. Mengandung cryoprotectan

Cryoprotectan • • Bahan yang melindungi spermatozoa Cryoprotectan di bedakan jadi 2 : 1. Ekstra seluler cryoprotectan 2. Intra selluler cryoprotectan

Ekstraseluler Cryoprotectan • Melindungi sel bagian luar yaitu membran • Perlindungan pada suhu diatas 0 o. C • Molekulnya besar Tidak dapat masuk kedalam membran. • Mengandung protein, karbohidrat dan lipid • Misal : Kuning telur, Skim milk, Full Milk

Intraselluler cryoprotectan • Melindungi sel di bawah suhu 0 o. C • Syaratnya bahan : 1. Tidak membeku di bawah 0 o. C 2. Bersifat higroskopis 3. Molekulnya kecil, sehingga dapat masuk membran. Misal : Glyserol, Dimethyl Sulfoxid (DMSO), Propanadiol, Ethylen glycol)

Komposisi pengencer Tris aminomethan kuning telur • A ( pengencer 1) Tris aminomethan 1, 6% (g/g) Citric acid 0, 9% Lactose 1, 4 % Raffinose 2, 5 % Destilled water 80% Kuning Telur 20% Penicillin 1. 000 IU/100 ml Streptomisin 0, 1 gr/100 ml B (pengencer 2). (A) + Glyserin 13%

Komposisi pengencer skim milk • A (Pengencer 1) 1. Skim milk 10% (g/g) 2. Glucose 1 % (g/g) 3. Penicilin 1. 000 IU/100 ml. 4. Streptomisin 0, 1 gr/100 ml 5. Kuning telur 5% (V/V) 6. Destilled water 80% (V/V) B ( Pengencer 2) (A) + 20% gliserin

Teknik pengenceran • Semen segar yang didapat bila telah memenuhi syarat untuk dibekukan diproses lebiih lanjut (Motilitas > 70%). • Semen segar + diluter A (pengencer yang ditentukan) dengan volume sama dengan semen segar. • Tambahkan sisa pengencer A 2 pada suhu 12 -15 o. C. • Pada suhu 5 o. C tambahkan diluter B yang berisi diluter A + gliserol yang dibuat hingga total gliserol adalah 13% dari total diluter.

Gliserolisasi • Setelah ditambahkan gliserol dimasukkan ke dalam straw. • Equilibrasi diatas 10 cm Nitrogen cair, sekitar 3 -4 jam, kemudian dimasukkan ke dalam Nitrogen cair dengan suhu -196 o. C

Fasilitas Laboratorium untuk pembekuan

Alat-alat untuk pembekuan

Alat-alat pembekuan Nitrogen cair di masukkan ke dalam Kontainer. Spermatozoa sebelum dimasukkan ke dalam nitrogen cair, harus Dilakukan ekuilibrasi, yaitu ditaruh 10 Cm diatas nitrogen cair, dengan Suhu – 25 o. C. Setelah dimasukkan nitrogen cair, Maka setelah 24 jam di lakukan Thawing untuk diuji kualitasnya Cryo tank

THAWING • Thawing adalah pencairan kembali setelah dibekukan. • Thawing bisa menggunakan air hangat, air kran atau es, yang disesuaikan dengan lama thawingnya (suhu semakin tinggi, maka waktu semakin cepat).

CARA THAWING • Pada suhu 370 C selama 15 detik • Pada suhu es (2 -5) 0 C selama 2 -5 menit • Air kran/sumur 15 detik

PENGENCERAN SEMEN 1. TRIS KUNING TELUR 2. SKIM KUNING TELUR

PENGENCERAN SEMEN 1. TRIS KUNING TELUR Tris Aminomethane Asam sitrat Laktosa Raffinosa Aquadest steril Kuning telur Penisilin Streptomisin : 0. 8 g : 0. 45 g : 0. 7 g : 1. 25 g : 40 ml : 10 ml : 0. 05 g

PENGENCERAN SEMEN 2. SKIM KUNING TELUR Susu skim bubuk : 5 g Glukosa Kuningtelur Penisilin Streptomisin : 0. 5 g : 2. 5 g : 0. 05 g

PENYIMPANAN SEMEN

Warna straw Holstein : Abu-abu Limosin : Pink Simental : Putih tansparan Brahman : Biru tua Ongole : Biru muda Angus : Orange Brangus : hijau tua Bali : merah Madura : hijau muda