PARTIE 3 b Fluorimtrie Spectroscopie dmission aussi appele
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Spectroscopie d’émission aussi appelée photoluminescence:
PARTIE 3 b : Fluorimétrie En réalité: Plusieurs transitions à partir de V 0 composent le spectre. Les spectres sont souvent décalés et en forme d’image miroir.
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Molécules fluorescentes: Rendement quantique de fluorescence Ff (entre 0 et 1) Ff = nombre de photons émis (If) nombre de photons absorbés (Ia)
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Durée de vie: Phénomène très bref contrairement à la phosphorescence qui implique une inversion de spin. En pratique, l’appareil excite en continue. Linéarité: Domaine de linéarité. À concentration élevée, l’interaction entre les molécules d’analyte fait diminuer la fluorescence ( quenching ) – les molécules voisines finissent par absorber les photons émis.
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Diagramme bloc: Lampe au xénon ou laser. Un deuxième monochromateur sépare les photons émis par fluorescence. La fluorescence est émise dans toutes les directions. La direction perpendiculaire est utilisée pour collecter les photons émis évitant de contaminer le détecteur avec le rayon incident.
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Instrument:
PARTIE 3 b : Fluorimétrie Caractéristiques: Sensibilité 1000 fois meilleure que l’absorption UV-VIS. Limitée au molécules fluorescentes. Dérivation de fluorescence: modification de la molécule pour qu’elle fluoresce (greffe ou association avec un réactif fluorophore par une réaction chimique, formation de complexes…).
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