Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego Katarzyna Kozio Magdalena

Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego Katarzyna Kozioł Magdalena Machowska Katarzyna Piekarowicz (Pracownia Białek Jądrowych, p. 41 c, e-mail: koziol@ibmb. uni. wroc. pl)

Cel ćwiczeń: n n n Analiza procesu dekondensacji chromatyny Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas dekondensacji Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej embrion ¨ larwa ¨ poczwarka ¨ jajniki ¨ n Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych

METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY - ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY -ORGANIZACJA CHROMATYNY - REPLIKACJA - BADANIE MITOZY - WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI ODTWARZANIE JĄDER KOM. : - ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba szponiasta) - LSS - DSP odbłoniona chromatyna ze spermy Xenopus (demembranated sperm chromatin) - inhibitor coctail - energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny), PCKinase -chromatyna -ekstrakt - energia

Analiza procesu dekondensacji chromatyny

Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka) http: //www. jove. com/details. php? id=908

Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A Widoczne pęcherzyki błonowe asocjujące z chromatyną Widoczne prekursory porów i kompletne kompleksy porowe.

Budowa otoczki jądrowej

LAMINY -wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej -kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej -regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen chromatynowych -wpływają na replikację, transkrypcję, splicing -zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy TYPY LAMIN (ludzkie) -B: (LMNB 1) - B 1 (LMNB 2) –B 2, B 3 -A/C (LMNA) , A, C, C 2, A 10 Molecular Biology of the Cell Alberts, B i wsp. , (1994)

Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro

Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej

Dymorfizm płciowy u Drosophila melanogaster

Budowa jajników u Drosophila melanogaster Jajniki Cewka jajnikowa (owariola)

Owariole i komory jajowe muszki owocowej

Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D. melanogaster przy użyciu mikroskopii konfokalnej.

Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego

Formowanie wrzeciona podziałowego The Cell A Molecular Approach Geoffrey M. Cooper Boston University Second Edition Sinauer Associates, Inc. , ISBN 0 -87893 -106 -62000

Dziękujemy za uwagę! Do zobaczenia na ćwiczeniach. Zaliczenie: - kolokwium ( termin do uzgodnienia) -praca na ćwiczeniach -obecność