OPTIKAI SPEKTROSZKPIA 2014 1 Fluoreszcens jelzanyagok KM okt
- Slides: 47
OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA 2014 1. Fluoreszcens jelzőanyagok (KM), okt. 1. 2. Fotokróm anyagok (BP), okt. 8. 3. Képalkotó eljárások (VT), okt. 15. 4. Fémkomplexek lumineszcenciája (BP), okt. 22. 5. Közeli infravörös spektroszkópia és mikroszkópia (GSz), okt. 29. 6. Fotodinámiás terápia (VT), nov. 5. 7. Cirkuláris dikroizmus spektroszkópia (KM), nov. 12. 8. 1
ALAPISMERETEK (vizsgára, doktori szigorlatra átismételni) Kémiai anyagszerkezettan V. OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA (Optsp 05) VI. A MOLEKULÁK FORGÓMOZGÁSA (Forgo 05) VII. A MOLEKULÁK REZGŐMOZGÁSA (Rezgo 05) VIII. A MOLEKULÁK ELEKTRONSZERKEZETE (Molel 05) X. LÉZEREK, LÉZERSPEKTROSZKÓPIAI MÓDSZEREK (Lezer 05) 2
Jablonski-diagram
A fluoreszcencia-mérés előnyei az abszorpcióméréssel szemben 1. Nem kell átlátszó minta 2. Nagyobb érzékenység 3. Háromszoros szelektivitás - gerjesztési hullámhossz szerint - emissziós hullámhossz szerint - lecsengési idő szerint Hátrány: a vegyületeknek csak kis hányada fluoreszkál 4
Fluoreszcens festékpróbák Cél: a mikrokörnyezet jellemzése a fluoreszcencia sáv J. R. LAKOWICZ, Principles of Fluorescence Spectroscopy, 2 nd Edition, Kluwer Academic, London, 1999 5
Vázlat Műszerek stacionárius spektrofluoriméter időkorrelált egyfoton-számlálás Kémiai szenzorok: ionok, molekulák kimutatása Polaritás szenzorok Viszkozitás szenzorok Fehérjék fluoreszcenciája / triptofán Távolságmérés: FRET 6
Spektrofluoriméterek -stacionárius - időfelbontásos ( F mérése, időkorrelált egyfoton-számlálás) 7
Stacionárius 8
Gerjesztési és emissziós spektrum Gerjesztési sp: hasonlít az abszorpciósra, S 0 →S 1, S 0 →S 2, ∙∙∙ átmenetek sávjai Emissziós sp: csak S 1 →S 0, 9
Időkorrelált egyfoton-számlálás 10
Fluoreszcencia lecsengési görbe 11
Kémiai szenzorok: ionok, molekulák kimutatása 12
Na+ indikátor Coro. Na Green 13
Na+ indikátor Na+ ionok eloszlása idegsejtben, mikroszkópos kép Coro. Na Green alkalmazásával, W. J. Tyler et al. , Plos. One 3, e 3511 (2008) 14
Na+ indikátor SBFI Gerjesztési spektrumot mérnek, ott max eltolódik Szelektív: a Na+ a K+ mellett is mérhető 15
Na+ indikátor SBFI-vel festett idegsejt 16
Klorid indikátor MQAE Szelektív: nitrát, foszfát nem oltják ki, Br-, I- igen Működése dinamikus kioltáson alapszik 17
Klorid indikátor Kloridion eloszlás idegsejtekben IF kép FLIM: fluorescence lifetime imaging 18
Dinamikus kioltás: Stern-Volmer egyenlet M + h M* M+ M+Q 19
A dezaktiválódás sebessége és fluoreszcencia-hatásfoka Kioltó nélkül Kioltóval 20
Stern-Volmer egyenlet 21
Polaritás szenzorok nílus vörös water, - methanol - acetonitrile - dimethylformamide, 6. acetone - ethyl acetate - dichloromethane - n-hexane - methyl-tertbutylether - cyclohexane - toluene. 22
Szolvatoktromizmus: a szín függ az oldószertől 23
Algasejtből nyert lipid testecskék rendeződése A minta nílus vörössel festve Kim G H et al. J Cell Sci 2001; 114: 2009 -2014 24
Nile red staining of neutral and polar lipids in SAM-6 -induced apoptosis on tumor cells. Pohle T et al. Cancer Res 2004; 64: 3900 -3906 © 2004 by American Association for Cancer Research
„charge transfer (CT)” festékek S 1 S 0 Oldószer polaritás 26
Polaritás hatása: Lippert-egyenlet ---+ G v. E _ ++++ 2 a 27
Lippert-egyenlet ---+ _ ++++ G v. E 2 a 28
Naftilamin-származékok Stokes eltolódása Lakowicz, p. 191 29
Viszkozitás szenzor 30
Festékmolekula orientációs relaxációja (rotációs diffuzió) Stokes-Einstein-Debye egyenlet f alaktényező (gömbalakra f = 1) C súrlódási tényező (0<C<1, ha a részecske nagy az oldószermolekulákhoz képest C ~ 1) h környezet viszkozitása VM molekula térfogat T hőmérséklet k Boltzmann állandó 31
Níluskék festék fluoreszcenciája ioncserélő gyantán Habuchi et al. , (Sapporo), Anal. Chem. 73, 366 -372 (2001) Gyanta: sztirol - divinilbenzol kopolimer Keresztkötések gyakorisága ( ) 8 % divinilbenzol Ioncserélő csoport: Na-szulfonát 32
or mérése: a fluoreszcencia depolarizáció időfüggését mérjük 33
Níluskék festék fluoreszcenciája ioncserélő gyantán 34
Kettős fluoreszcencia: twisted intramoleculat charge transfer = TICT DMANCN fl. színképe etilénglikolban, a két sáv int. aránya viszkozitásfüggő Lakowicz, p. 201 35
Fluoreszkáló aminosavak fenil-alanin tirozin triptofán 36
Triptofán abszorpciós és emissziós spektruma (víz, p. H 7) Lakowicz, p. 446 37
A triptofán környezetének hatása fehérjék fluoreszcencia spektrumára 1) Apoazurin Pfl 2) T 1 ribonuclease Lakowicz p. 453 3) staphillococcus nuclease 4) glucagon 38
Lakowicz, p. 461 39
Lakowicz, p. 461 40
Rezonancia energia-átadás (Förster resonance energy transfer = FRET) Távolságmérés fluoreszcenciával! Mikroszkóppal a hullámhossztól függő, UVfénnyel ~ 200 nm-es felbontás érhető el FRET: 2 -10 nm-es távolságok érzékelhetők 41
Donor festék – akceptor festék, D fluoreszc. tartománya átfed A absz. tartományával. 42
Ha D és A távolsága kicsi, FRET, D-t gerjesztve az A fluoreszkál A hatás 1/r 6 -nal arányos 43
Példa: DNS –foszfolipid kölcsönhatás vizsgálata C. Madeira, Biophys. J. 85, 3106 (2003) 44
Akceptor Donor: Et. Br (etidium bromid) 45
BODIPY fluoreszcencia Et. Br abszorpció 46
Fehérjék konformáció-változását lehet FRET-tel követni 47
- 11. okt. 2006
- Okt
- Optikai tárak
- Optikai tárak
- Optikai minőségellenőrzés
- Sugármenet
- Optikai adattárolók
- Optikai adattárolók
- Hypocyphose
- Ww1 to great depression cloze notes
- Orden 3814/2014
- 2015 geografijos egzamino atsakymai
- Who invented car
- 2014 brain wrinkles
- Protoctista
- 2014 pearson education inc
- Rtgs bd
- La loi lamy
- Lefoulon ortodoncia
- Concrete bridge code
- Ddb board regulation no.1 series of 2014
- Marshall cavendish education login
- Jessica hall (miss senorita) 2014
- Cpea results 2014 grenada
- Barem de convertire a punctelor in note
- Spite movie
- Implementasi uu no 33 tahun 2014
- Kerpel 2014
- Uel observe os seguintes numeros
- Poat
- Conae 2014
- Powerpoint 2014
- Sfc 2014
- Niall horan age 2014
- Payroll conference 2014
- Gnu dirty pillow 2014
- Mars 2014
- W 2014 roku zdarzyło się w polsce 34970
- Www.teachitscience.co.uk 2018 answers
- Zafiro amway
- Personenbelasting aanslagjaar 2014
- 2014 pearson education inc
- 2014 pearson education inc
- Veterinary nurse conduct and discipline rules 2014
- 2014 pearson education inc
- Cite one real life example in your school or community
- Guida ai fondi strutturali europei 2014-2020
- Www cxc