Ontwikkelen van een methode voor het bepalen van
Ontwikkelen van een methode voor het bepalen van magnesiumglycerofosfaat met HPLC-ELSD Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Stagementor: Dhr. Gabriël Denolf Stagegever: Dhr. Stefan Daenekynt Promotor: Dhr. Bart Quartier 1
�Probleemstelling en doel �HPLC �ELSD �Methode-ontwikkeling �Besluit Inhoudstafel 2
�Mg-bepaling vroeger via titratie �Nadelen: �Interferentie �Niet specifiek �Oplossing: HPLC-ELSD �Magnesium is niet UV-gevoelig DAD kan niet gebruikt worden Probleemstelling en doel 3
�High Performance Liquid Chromatography �Scheidingstechniek onder verhoogde druk �Stationaire fase: gepakte kolom (hier: ionenuitwisselingskolom) �Mobiele fase HPLC 4
�Evaporative � 3 Light Scattering Detection stappen: �Verneveling: vorming van aërosol �Verdamping: vorming van gesuspendeerde partikels �Detectie: gesuspendeerde deeltjes passeren lichtstraal ELSD 5
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 3 N HCl 100 x verdund + 2 x verdund 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA 0, 2% TFA 0, 3% TFA 0, 15% TFA Prevail C 18 Primsep 100 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min Methode-ontwikkeling 6
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 0, 03 N HCl 0, 4% azijnzuur Prevail C 18 1 m. L/ min 7
�Methode 1 8
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 0, 03 N HCl 0, 4% azijnzuur Prevail C 18 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 9
�Methode 2 10
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 0, 4% azijnzuur Prevail C 18 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 11
�Methode 3 0, 007 N HCl �Methode 3 0, 1 N HCl 12
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA Prevail C 18 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 13
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA Prevail C 18 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 14
�Methode 5 15
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA Prevail C 18 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 16
�Methode 6 17
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 7 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 3 N HCl 100 x verdund 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA 0, 2% TFA Prevail C 18 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 18
�Methode 7 19
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 7 8 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 3 N HCl 100 x verdund 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA 0, 2% TFA 0, 3% TFA Prevail C 18 Primsep 100 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 20
�Methode 8 21
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 3 N HCl 100 x verdund + 2 x verdund 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA 0, 2% TFA 0, 3% TFA Prevail C 18 Primsep 100 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 22
Debiet Kolom Mobiele fase Oplosmiddel 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0, 03 N HCl 0, 007 N tot 0, 1 N HCl 3 N HCl 100 x verdund + 2 x verdund 0, 4% azijnzuur 0, 04% TFA 0, 06% TFA 0, 1% TFA 0, 2% TFA 0, 3% TFA 0, 15% TFA Prevail C 18 Primsep 100 Primsep 100 1 m. L/ min 0, 5 m. L/ min 23
�Methode 10 24
standaardreeks Mg glycerophosphate 18000000 16000000 AUC 14000000 12000000 R 2 = @ 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 0 0 0. 05 0. 15 0. 2 mg/ml Mg Standaardreeks 25
�Magnesiumcarbonaat �Metarelax 26
� Kolom: Primsep 100 5µm 250 mmx 4, 6 mm � Kolomtemperatuur: 35°C � Debiet mobiele fase: 0, 5 m. L/minuut � Injectievolume staal: 10µl � Temperatuur ELSD: 40°C � Gasflow: 1, 5 L/minuut � Gain: 1 � Looptijd: 25 minuten � Mobiele fase: water/acetonitril/TFA (30/70/0, 15) � Oplosmiddel 1 m. L 3 N HCl dat aangelengd wordt tot 100 m. L met water. � Toekomst: ◦ Oplosmiddel verder aanpassen ◦ Standaardreeks met zuiver magnesium ◦ Validatie Besluit 27
Ontwikkelen van een methode voor het bepalen van magnesiumglycerofosfaat met HPLC-ELSD Ameline Roose Hogeschool West-Vlaanderen Stagementor: Dhr. Gabriël Denolf Stagegever: Dhr. Stefan Daenekynt Promotor: Dhr. Bart Quartier 28
- Slides: 28