Oleh Purwadi M Si Universitas Tulang Bawang Bandar

Oleh: Purwadi, M. Si. Universitas Tulang Bawang, Bandar Lampung, 2009

Kromatografi Kolom Terbuka Color Sistem pemasukan sampel: manual, tidak volumetrik Injector Waktu analisis lama, mengandalkan gaya grafitasi dan kapiler pompa Hasil pemisahan kurang baik pengemasan kolom Kesulitan Pengamatan hasil pemisahan untuk analit tidak berwarna Detektor Kesulitan penghitungan kadar integrator

KCKT dikembangkan dari kromatografi kolom terbuka untuk menjawab kekurang-kekurangan tersebut Injector: Sistem pemasukan sampel: sample loop dan robotik injektor, sangat volumetrik Pompa: Waktu analisis singkat, pengulangan/presisi baik Kolom: baja, packing kompak, partikel sangat kecil, tekanan dapat dibuat besar Hasil pemisahan baik Detektor: semua zat dapat diamati (tidak harus berwarna) Integrator: dilengkapi komputer, bisa menghitung Au. C mudah penghitungan kadar Sehingga disebut: Kinerja Tinggi

BAGAN SISTEM KCKT detektor pompa injektor kolom oven Wadah solven integrator

WADAH FASE GERAK Merupakan tandon berisi fase gerak Mempunyai sistem penyaring

POMPA Merupakan sistem agar fase gerak mengalir. Kinerja pompa yang diinginkan : l Tekanan yang dihasilkan tinggi l Fluktuasi tekanan rendah l Kecepatan aliran fase gerak tepat

INJEKTOR: Alat untuk pemasukan sampel ke dalam sistem KCKT Pump Column [INJECT] [LOAD]

Sistem sample loop injektor posisi load pompa kolom sample loop Posisi inject pompa kolom

OVEN KOLOM – instrumen pemanas Syarat : 1. Keseragaman temperatur yang baik 2. Kestabilan temperatur yang baik 3. Ketepatan kontrol temperatur yang baik

Kolom pada KCKT > Penampang: baja tahan karat, tahan tekanan tinggi ØUkuran partikel sangat kecil: pengepakan lebih kompak, hasil pemisahan lebih baik ØDapat dipakai berulang

DETEKTOR HPLC Yang umum dipakai l Detektor Ultraviolet / Visible (UV/VIS) l Detektor Photodiode Array (PDA) l Detektor Fluorescence (RF) l Detektor Konduktivitas (CDD) l Detektor Refraktive Indeks (RID) l Detektor Elektrokimia (ECD) l Detektor spektrometer massa

DETEKTOR SPEKTROFOTOMETER UV/VIS Prinsip: penyerapan sebagian energi (hv) oleh molekul pada panjang gelombang tertentu => tereksitasi elektronik Ein kuvet Eout l Hk. Lambert-Beer A= e. Cl = - log (Eout / Ein)

absorbansi A= e. Cl = - log (Eout / Ein) 1 Kisaran linear konsentrasi

Pemilihan pjg gelb. : quantitative / preparative? 275 nm 208 nm

Detektor Photodiode Array Sample Cell D 2 / W lamp Grating satu elemen dapat Mendeteksi absorban Pada satu pjg gelb. . 512 Elements Photodiode Array

Detektor Photodiode Array : Kromatogram 3 D Pa nj an gg elb . Absorbansi Spektrum kromatogram waktu

Detektor Photodiode Array Puncak dapat di identifikasi dengan spektrum UV. l Pemeriksaan kemurnian puncak dapat dilakukan. --overlap 3 spektrum --rasio kromatogram --perbandingan threshold dan similarity index. l

Detektor Spektrofluoresen Excitation Wavelength + hn 1 * hn 1 A* A * hn 2+ hn 2 Emission Wavelength Fluorescence A

Rancangan Cell untuk detektor Fluorescence

Reagen derivatisasi Reagen OPA untuk amine primer A CHO + R-NH 2 CHO o-phthalaldhyde (OPA) A N-R Reagen ADAM untuk asam lemak + R-COOH CHN 2 9 -anthryldiazomethane (ADAM) CH 2 OCOR

Detektor Refraktive Indeks Sistem optik

Detektor Refraktive Indeks

BAGIAN DARI SISTEM HPLC Kromatogram gula l l Analytical Conditions v Column : Shim-pack CLCNH 2 v Mobile phase : Acetonitrile / water =7/3 v Flow rate : 1. 0 m. L/min v Temperature : Ambient Peaks 1. Glycerol 2. Xylose 3. Fructose 4. Glucose 5. Sucrose 6. Manose 7. Lactose

Detektor Konduktifitas V I A A L K (conductivity) = I [A] / E [V] =A [cm 2] / L [cm] * k (k : specific conductivity) k= (I/E)*(L/A) elektroda

Detektor Konduktifitas sangat dipengaruhi temperatur. l Cell harus diletakkan pada kondisi temperatur terkontrol l

Kromatogram anion dalam air laut l l Analytical Conditions v Column : Shim-pack IC-A 3 v Mobile phase : 8. 0 m. M p-hydroxybenzoic acid 3. 2 m. M Bis-Tris * v Flow rate : 1. 5 m. L/min v Temperature : 40 C v Injection Volume : 100 u. L Peaks v 1. F (1. 4 ppm) v 2. Cl (10200 ppm) v 3. NO 2 (10 ppm) v 4. Br (43 ppm) v 5. NO 3 (44 ppm) v 6. SO 4 (431 ppm) Bis-Tris : bis (2 -hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane

Perbandingan detektor LOD : Limit deteksi (S/N=3) GC : Gradient Compatibility