ODREIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I URINU

ODREĐIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I URINU Danica Matišić

Elektroforeza serumskih proteina KROHEM SKUPINA Pododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologiju IMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Vizualni pregled Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Bence Jones protein? Elektroforeza proteina u mokraći (100 x ukonc. uzorak) Negativ. nalaz Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100 x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim Prisutan BJ protein Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Definicija M-P (određ. razreda i tipa) Denzitometrijska kvantifikacija M-P Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

A. R. Bradwell: Free Light Chain Assay Razvoj Free Light Chain reagensa za kvantitativno određivanje slobodnih lakih lanaca, SLL, kapa (κ) ili lambda (λ) tipa, otvorio je mogućnost njihovih aplikacija i povećao njihovu kliničku važnost. Refer. interv. : SLL κ Refer. interv. : SLL λ Refer. interv. κ/λ SERUM 3, 30 – 19, 40 5, 71 – 26, 3 0, 26 – 1, 65 URIN 1, 35 – 24, 19 0, 24 – 6, 66 2, 04 – 10, 37

B: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravih ispitanika, bolesnika sa NSMM i MMLL kapa i lambda tipa A Osjetljivost SPE Osjetljivost IF A: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravih ispitanika, bubrežnih bolesnika i bolesnika sa MMLL kapa i lambda tipa B

Serum Free Light Chain Measurements: Move to Center Stage Arthur R. Bradwell (Clinical Chemistry. 2005; 51: 805 -807. ) serumska konc. SLL korelira samo s aktivnošću koštane srži, što znači da njihov nalaz može biti neovisan biljeg monoklonskih gamapatija jedan posebno važan aspekt SLL je njihov kratak poluživot: 2 -3 sata za kapu i 5– 6 sati za lambdu; što je 150 x kraće vrijeme od 21 dana koliko je poluživot Ig. G molekule tako konc. slobodnih lakih lanaca omogućuje vrlo brzo procjenu učinka kemoterapije: 92 -128 dana brže nego konc. M Ig bolesnici koji su prema nalazu intaktnog M Ig, u remisiji mogu još uvijek imati povišenu konc. SLL što indicira ostatnu bolest koristeći isti argument, bolesnici čija konc SLL počinje rasti nakon modernog intenzivnog tretmana ide u prilog relapsu bolesti

FREELITE™ Serum - Free Light Chain Assays Kvantitativno mjerenj SLL pokazuje da abnormalnu koncentraciju lakih lanaca ili njihov omjer imaju 96% bolesnika s IIMM 82% bolesnika s NSMM 98 % sa AL amiloidozom svi s LCMM i LCDD Kvantitativno mjerenje SLL može pomoći u postavljanju Dijagnoze: kod LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i za Praćenje: terapije i toka same bolesti kod: IIMM, LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i praćenje minimalne rezidualne bolesti u mnogih bolesnika s MM koji su bili u kompletnoj remisiji prema standarnim testovima

Određivanje konc SLL ima posebnu ulogu u dijgnoastici AL amiloidoze s obzirom da su izvor fibrila monokl. SLL Njihova je konc. nedostatna da bi se registrirala elektroforezom Katzmann i suradnici su pokazali da određ. konc. SLL u kombinaciji s IF omogućuje postavljanje dijagnoze AL amiloidoze: kombinacijom određivanja SLL i IF u grupi od 110 bolesnika oni su pravilno dijagnosticirali 109 (99 %) Koristeći samo konc. SLL pravilno je dijagnosticirano 91 % Novi internacionalni konsenzus za vođenje AL amiloidoze uključuje mjerenje konc. SLL Dispenzieri i sur: uvođenje određivanja SLL povećalo je moć procjene hematološkog odgovora kod bolesnika s niskim tumorskim uzorkom.

Koncentracija slobodnih lakih lanaca Ig ovisi o produkciji plazma stanica i bubrežnom klirensu. Kod nekih bolesnika s monoklonskom gamapatijom količina SLL ostaje ispod reapsorpcionog kapaciteta bubrega tako će abnormalna konc. serumskih SLL biti nedetektibilna u urinu u tim slučajevima rezultat SLL u urinu biti će nepouzdan Katzmann JA. i Hill P. G. pokazali su na velikom broju bolesnika, u dvije odvojene studije, da zbog oštećenja bubrega (približno 25 % bolesnika s monoklonskim gamapatijama) možemo naći lažno pozitivne nalaze SLL u serumu odnosno lažno negativne u urinu. Uz poliklonsku sintezu imunoglobulina i/ili bubrežnog oštećenja, naći ćemo 10 – 20 x povećanu sintezu lakih lanaca u serumu Bubrežna ekskrecija SLL raste s koncentracijom u serumu ali značajno opada kada je visoka koncentracija kombinirana s bubrežnim oštećenjem.

Skupljanje 24 satnog urina je : mukotrpno za bolesnike i uglavnom netočno; -laboratorijski postupak evaluacije monoklonskog proteina se znatno produljuje Stoga mnogi kliničari sugeriraju da se 24 satni urin eliminira iz skriniga M-P Urin će se obrađivati diskontinuirano tj. kod raznih disproteinemija kao i i za praćenje bolesti jednom kad je već monoklonski protein identificiran.

Mjesečne novine Medicinskog laboratorija Mayo klinike (Communique): august/ 2007: 1. Kvantitativno mjerenje SLL uz SPE i IE postiže se veća osjetljivost u dijagnostici monoklonskih gamapatija što je posebno važno kod: MMLL, AL amiloidoza, LLDD, NSMM 2. Primjenjujući #87997 Monoclonal Protein Study, Expanded Panel, Serum, (ukupni prot. , SPE , kapa i lambda u serumu i κ: λ omjer) eliminiramo potrebu sakupljanja 24 satnog urina 3. Određivanjem SLL moguće je razlučiti: visoko i nisko rizične bolesnike u skupini MGUS: bolesnici s abnormalnim κ: λ omjerom imaju 2, 5 x povećan rizik od progresije bolesti u MM ili slične bolesti za većinu MGUS bolesnika preporuča se laboratorijska obrada jednom godišnje kako približno 40 % MGUS dijagnosticiranih bolesnika spada u nisko rizične, kombinacijom κ: λ omjera i koncentracije M-proteina može se kod tih bolesnika znatno skratiti godišnji program kontrole (studija provedena na 1140 bolesnika) 4. FREELITE™ Serum može se koristiti za praćenje toka bolesti kod bolesnika sa M-proteinom koji nije mjerljiv SPE čime bi kliničari mogli smanjiti broj biopsija koštanih srži

KROHEM SKUPINA Pododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologiju IMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Elektroforeza serumskih proteina Vizualni pregled Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Bence Jones protein? FREELITE™ : SLLκ, SLLλ + κ/λ Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100 x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim Elektroforeza proteina u mokraći Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Definicija M-P (određ. razreda i tipa) Denzitometrijska kvantifikacija M-P (100 x ukonc. uzorak) Negativ. nalaz Prisutan BJ protein Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

Hill PG, Forsyth JM, Rai B, Mayne S. Serum free light chains: an alternative test to urine Bence Jones proteins when screening for monoclonal gammopathies. Clin Chem 2006; 52: 1743 -1748. Elektroforeza proteina u serumu + FREELITE kapa i lambda i Kapa/lambda omjer FREELITE: nalaz abnormalan nalaz normalan SPE normalna SPE abnormalna SPE normalna Prisutan BJP Prisutan intaktni monokl. Ig ili BJP Prisutan intaktni monokl. Ig M-P negativan

FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

Kristali Bence-Jones proteina Razumijevanje strukture kristala BJP moglo bi biti ključno za razvoj selektivne terapije lijekovima. Microgravity STS-95 Space is the laboratory of the next millennium Mikrogravitacijski uvjeti u svemiru su jedinstveni okoliš za istraživanja koja vode novim produktima i tehnologijama. STS-80