Numration des rticulocytes Anne 2008 quipe pdagogique du

Numération des réticulocytes Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 1

Érythropoïèse : genèse du réticulocyte MOELLE OSSEUSE ROUGE Proérythroblaste Érythroblaste basophile II Érythroblaste polychromatophile Érythroblaste acidophile Réticulocyte ou Proérythrocyte SANG Réticulocyte ou Proérythrocyte Hématie, Érythrocyte ou Globule rouge Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 2

Présentation du réticulocyte n Globule rouge n n n passé dans le sang depuis moins de 48 heures témoin de l’activité érythropoïétique de la moelle osseuse rouge Cellule n n n de taille légèrement plus élevée que l’hématie mature non saturée en hémoglobine, possédant encore quelques ribosomes et des traces de protoporphyrine permettant de terminer la synthèse de l’hémoglobine Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 3

Mise en évidence n Cellule non repérable à la coloration au MGG n n n À peine plus grosse À peine plus uniformément colorée en gris-bleuté Cellule identifiable grâce à la révélation des ribosomes et traces de protoporphyrine par n n Précipitation (colorants vitaux) Marquage spécifique de l’ARN ribosomal Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 4

Technique de coloration n Colorants n n Incubation n Bleu de Crésyl Brillant, Bleu de Una, New Methylen Blue … volume à volume du sang avec le colorant (sauf hématocrite faible : 1 volume de colorant pour 2 volumes de sang) 10 minutes (37°C) à 20 minutes (température laboratoire) Réalisation d’un frottis fin et séché rapidement Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 5

Résultat de la coloration n au microscope grossissement x 1000 à immersion Évolution cytologique durant 24 à 48 heures avec n charge progressive en hémoglobine n disparition des restes ribosomaux Réticulocytes Attention aux artéfacts Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET Hématie 6

Dénombrement n n Compter tous les globules rouges (hématies matures et réticulocytes) présents dans un champ Identifier et dénombrer les réticulocytes présents parmi eux Poursuivre le dénombrement jusqu’à avoir identifier un nombre suffisant de réticulocytes (environ 50) Si les zones sont homogènes, les globules rouges ne peuvent être comptés que tous les cinq champs Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 7

Dénombrement 43 globules rouges dont 5 réticulocytes Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 8

Dénombrement 65 globules rouges dont 2 réticulocytes Année 2008 et de nombreux artéfacts !!! Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 9

Résultat du dénombrement n En dénombrant les globules rouges 1 champ sur 5 n n n Calcul de la valeur relative en % n n n Total de globules rouges : 314 Total de réticulocytes : 110 %rétic = 110 x 100 / (314 x 5) = 1100 / 1570 = 7 % des globules rouges sont des réticulocytes Calcul de la valeur absolue en 109 /L n À l’aide du résultat de la numération des hématies, par exemple 2. 1012 /L Nrétic = 7 x 2 x 1012 / 100 = 140. 109 /L Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 10

Interprétation du résultat n Numération réalisée en cas d’anémie n n taux d’hémoglobine < 110 g/l taux d’hémoglobine < 130 g/L pour en estimer le caractère régénératif selon un seuil de 120. 109 /L < arégénérative n ≥ régénérative Conclusion n Nrétic = 140. 109/L : anémie régénérative Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET 11