Ndorov imunoterapie zaloen na instalaci ligand fagocytrnch receptor

Nádorová imunoterapie založená na instalaci ligandů fagocytárních receptorů na povrch nádorových buněk Jan Ženka Katedra medicínské biologie PřF JU České Budějovice

Inspirace: SR/CR myši –Zheng Cui, 1999 SR – spontaneous regresion CR – cancer resistant neutrofily, makrofágy, NK buňky …… ROZPOZNÁNÍ LIKVIDACE!!! SR/CR myši ? ? 15% lidí : rozety granulocytů, prosinec-březen, stres - NE !? Pomoc při rozeznání PAMPs na nádorech

CO? - ligandy spojené s fagocytozou • laminarin (Dectin-1) • manan (MR, MBL – i. C 3 b) • formylmetioninové peptidy (FPR) JAK? - i. t. aplikace kotvení na nádorové buňky - BAM (DOPE), SMCC PROČ? - 1/ fagocytární ligandy musejí být kotvené 2/ nasměrování fagocytárního ataku Synergie se stimulací TLR – mohutná zánětlivá infiltrace s následným nasměrováním fagocytů na nádorové buňky s instalovanými ligandy fagocytárních receptorů

mean tumor volume (mm 3) Melanom B 16 -F 10/myš LPS phagocytic ligand LPS + phagocytic ligand PBS 6000 5000 4000 * 3000 * * 2000 1000 * * * 2 4 * * 0 0 * * 6 days * * 8 * * 10 * * 12 * * * 14 * P ≤ 0, 05 * * P ≤ 0, 01 * * * P ≤ 0, 005 * * * P ≤ 0, 001 compared to control (PBS) Phagocytic ligands: Laminarin - BAM, DOPE, SMCC Mannan - BAM, DOPE, SMCC f-MLF - BAM, DOPE, SMCC

Úkoly: Ø Kotvení komplexních PAMPs Ø Náhrada LPS Ø Studium mechanismů

Kotvení komplexních PAMPs Zymosan - BAM 3500 Zym-BAM + LPS Zym-BAM + flag PBS 2500 2000 ** *** 1500 * 500 Δ ** 0 0 2 Δ ** 4 Δ* * 6 days 8 10 * ****** * *** 1000 *** mean tumor volume [mm 2] 3000 12 * 14 *P ≤ 0, 05, **P ≤ 0, 01, ***P ≤ 0, 005, ****P≤ 0, 001, *****P ≤ 0, 0005, ******P ≤ 0, 0001 compared to control (PBS) Δ P ≤ 0, 05 compared to Zym-BAM

Gram negativní bakterie A - Stenotrophomonas maltophilia B - Serratia marcescens C - Serratia marcescens - oligolysine A 7000 B C K 6000 4000 ** 3000 * * 0 0 2 4 6 Days 8 * P ≤ 0, 05 * * P ≤ 0, 01 * * * P ≤ 0, 005 * *** *** *** 1000 ** *** 2000 *** ** mean tumor volume (mm 3) 5000 10 12 compared to control 14

Bakterie neobsahující LPS

Náhrada LPS Slabý efekt: - Flagellin - Monophosphoryl Lipid A (MPLA) - Imiquimod (R-837) Střední efekt: - beta glucan Silný efekt: - Resiquimod (R-848)

R-848/mannan-BAM R-848 + mannan-BAM PBS (control) 4000 3500 mean tumor volume (mm 3) 3000 2500 2000 1500 1000 o * 500 o o o * * * o o * * 0 0 2 4 6 8 days 10 12 14

R-848/mannan-SMCC + Listeria monocytogenes + POLY I: C

A: L. m. -SMCC + man-SMCC B: L. m. -SMCC + R-848 + man-SMCC re (1/5) C: L. m. -SMCC + R-848 + POLY I: C + man-SMCC (re 0/5) D: R-848 + man-SMCC E: R-848 + POLY I: C + man-SMCC F: PBS (control)

Studium mechanismů Silná granulocytární infiltrace následovaná makrofágy (průtoková cytometrie, histologie)

Neutrophily + B 16 -F 10 melanomové buňky

Neutrophily + B 16 -F 10 melanomové buňky (frustrovaná fagocytóza) Mannan-BAM covered melanoma cells Laminarin-BAM covered Melanoma cells PBS (control)

Frustrovaná fagocytoza, f-MLFKK-BAM (ELMI)

Makrofágy (PMJ 2 R) + B 16 -F 10 melanomové buňky

studenti: Hana Maršíková Magdalena Čechová Veronika Maierová Marie Auerová Ivana Švecová Pavlína Bruzlová Zuzana Kumžáková Štěpánka Čunátová Zuzana Vlčková Veronika Caisová Petra Rozsypalová Nikol Vácová Markéta Wachtlová Andra Vieru Simona Glaserová Hana Husníková Julie Fáberová Markéta Kovářová Petra Sváčková Adéla Jačková Denisa Sváčková Eva Waldmannová VŠ: prof. RNDr. Jan Kopecký, CSc. (PřF JU, Č. Budějovice) RNDr. Tereza Janotová (PřF JU, Č. Budějovice) Mgr. Jaroslava Lieskovská, Ph. D. (PřF JU, Č. Budějovice) RNDr. Marie Jalovecká, Ph. D. (PaÚ AVČR, Č. Budějovice) RNDr. Jiří Salát, Ph. D (VÚVL, Brno) MUDr. Katarína Lukáčová (Nemocnice Č. Budějovice) RNDr. Marie Horká, Ph. D (IACH AVČR, Brno)

Terapeutika: 1/ TCEP: Tris(2 -carboxyethyl)phosphine (Sigma) LD 50, dermální, 3000 mg/kg, krysa

2/ Heat Killed Listeria monocytogenes (Invivo. Gen) OSHA Hazards: No known OSHA hazards. (Occupational Safety & Health Administration) Studována jako adjuvans v 14 klinických studiích 3/ Resiquimod (Tocris) 1 -[4 -Amino-2 -(ethoxymethyl)-1 H-imidazo[4, 5 -c]quinolin-1 -yl]-2 -methylpropan-2 -ol 21 klinických studií, z nich 2 ukončené, lokální aplikace

4/ POLY I: C (Sigma) 320 klinických studií včetně jedné dokončené 5/ manan (Sigma) polymer manozy (Mw 30 – 60 000) Podle směrnice (ES) č. 1272/2008 není nebezpečnou látkou ani směsí. Tato látka není při hodnocení podle směrnice 67/548/EHS nebezpečná.

6/ SMCC (Thermo) Succinimidyl 4 -(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1 -carboxylate To the best of our knowledge, the toxicological properties of this product have not been thoroughly investigated (Thermo).

Vyléčení jedné myši: Látka Cena látky Cena jedné terapeutické dávky (Kč) 1, 5 Cena terapie jedné myši (Kč) 2 g – 4400 Kč Množství na jednu terapeutickou dávku 0, 7 mg TCEP R-848 50 mg 12500 Kč 0, 025 mg 6, 25 75 POLY I: C 25 mg 5800 Kč 0, 025 mg 5, 8 69, 6 Listeria monocytogenes 1010 3000 Kč 50 mil. 15 180 Manan 1 g 9000 Kč 0, 625 mg 5, 625 67, 5 SMCC 50 mg 3000 Kč 0, 005 mg 0, 3 3, 6 Celkem 413, 7 Kč 18

Děkuji za pozornost