NASTAVNA TEMA BAKTERIOLOKE HRANJIVE PODLOGE Predmet MIKROBIOLOGIJA Smjer

NASTAVNA TEMA: BAKTERIOLOŠKE HRANJIVE PODLOGE Predmet: MIKROBIOLOGIJA Smjer : ZLT, ST, FT Pripremila: Ines Mišetić Lašić, bacc. med. lab dijagnostike

BAKTERIOLOŠKE HRANJIVE PODLOGE

PONOVIMO: ISHODI KOJE SMO DO SADA USVOJILI ! Razlog uzgoja bakterija u laboratoriju je taj da se iz biološkog uzorka izolira i identificira patogena bakterija koja je uzrokovala infekciju. Drugi važan razlog je da se ispita osjetljivost izolirane bakterije na lijekove antibiotike zbog terapije za pacijenta. Da bi uzgojili bakteriju u laboratoriju potrebni su određeni uvjeti a jedan od njih je pripremiti odgovarajuća hranilišta (bakteriološke podloge)za uzgoj. Pogledajmo kako se to radi?

ŠTO SU BAKTERIOLOŠKE PODLOGE? hranjivi medij koji svojim sastavom omogućuje rast bakterija osnovna namjena je uzgoj bakterija u laboratorijskim uvjetima Zašto uzgajamo bakterije? ? o o o Identifikacijom bakterija postavljamo dijagnozu Proučavamo njihove osobine Provjeravamo osjetljivost prema antibioticima

SASTAV HRANJIVIH PODLOGA - Bakterije za svoj rast i razvoj trebaju hranjive podloge različitog sastava: voda bjelančevine ugljikohidrati vitamini purini mineralne soli, elemente u tragovima, velike količine destilirane vode

PREMA PODRIJETLU, BAKTERIOLOŠKE HRANJIVE PODLOGE MOGU BITI: 1)PRIRODNE HRANJIVE PODLOGE - u izvornom obliku se nalaze u prirodi, a povoljan sastav omogućuje rast i razmnožavanje bakterija (krvni serum, mlijeko) 2)SINTETIČKE HRANJIVE PODLOGE - standardizirane, kemijski sastav točno određen 3)POLUSINTETIČKE HRANJIVE PODLOGE - kombiniranje sastojaka prirodnih i sintetičkih hranjivih podloga

PREMA KONZISTENCIJI RAZLIKUJEMO: 1) TEKUĆE HRANJIVE PODLOGE- bujon- za uzgoj uzoraka sa samo 1 vrstom bakterija 2) POLUKRUTE (POLUTEKUĆE) HRANJIVE PODLOGEnastaju dodavanjem male količine agara tekućoj podlozi. Agar je ekstrakt morske alge koji ne utječe na hranjivu vrijednost podloge već joj daje čvrstoću. Osobina agara je da se na temperaturi preko 100 stupnjeva otopa a hlađenjem prelazi u kruto stanje. 3) KRUTE HRANJIVE PODLOGE- agar- omogućuju rast različitih bakterijskih vrsta i raspoznavanje kolonija

PREMA NAMJENI BAKTERIOLOŠKE PODLOGE MOŽEMO PODIJELITI NA: 1) HRANJIVE PODLOGE ZA IZDVAJANJE BAKTERIJA IZ - MATERIJALA Obiluju hranjivim tvarima, na njih se nasađuju primarno sterilni uzorci ˝zahtjevnijih˝ bakterijskih vrsta 2) SELEKTIVNE HRANJIVE PODLOGE - Omogućuju bolji rast jedne vrste bakterija, a inhibiraju rast ostalih vrsta, obično iz primarno nesterilnih uzoraka - Postizanje selektivnosti dodatkom inhibicijskih tvari za neke vrste bakterija (antibiotici, soli, boje) 3) DIFERENCIJALNE HRANJIVE PODLOGE - Služe za razlikovanje pojedinih bakterijskih vrsta - Ne sadrže inhibirajuće tvari

4) HRANJIVE PODLOGE ZA ODREĐIVANJE BIOKEMIJSKIH OSOBINA 5) HRANJIVE PODLOGE ZA ČUVANJE BAKTERIJSKIH KULTURA namjena: da se bakterije na njima uzgoje i što duže održe živima 6) HRANJIVE PODLOGE ZA POSEBNE NAMJENE za dokazivanje osjetljivosti bakterija prema antimikrobnim tvarima npr-. Mueller-Hintonov agar 7) TRANSPORTNE HRANJIVE PODLOGE

OSNOVNE HRANJIVE PODLOGE HRANJIVI BUJON= osnovna tekuća hranjiva podloga GLUKOZNI BUJON= nastaje dodavanjem glukoze, a SERUMSKI BUJON dodavanjem seruma osnovnoj podlozi HRANJIVI AGAR= osnovna kruta hranjiva podloga KRVNI AGAR- smjesi hranjivog agara se doda sterilna ovčja krv

DIFERENCIJALNE HRANJIVE PODLOGE 1) KRVNI AGAR-kruta hranjiva podloga, služi za nasijavanje briseva ždrijela, uha, nosa, rana. . . Bakterije mogu stvoriti alfa, beta ili gama hemolizu.

2) URI SELECT- žuta kruta podloga za nasijavanje urina i izoliranje patogenih bakterija koje uzrokuju urinarne infekcije 3) VRBG- VIOLET RED GLUKOZA AGAR- kruta roza podloga, za izolaciju bakterija iz hrane

SELEKTIVNE HRANJIVE PODLOGE 1) LOWENSTEIN JENSENOVA PODLOGA-kosi agar svijetlozelene boje u epruveti, za nasijavanje sputuma i uzgoj bacila tuberkuloze 2) SS AGAR-SALMONELA, SHIGELA AGARselektivna svijetlosmeđa podloga za izolaciju Salmonele i Shigele iz fecesa i namirnica 3) ENDO AGAR- kruta podloga roze boje za uzgoj E. coli i ostalih gram negativnih bakterija 4) KARMALI AGAR- za nasijavanje fecesa i uzgoj Campylobacter

LOWENSTEIN JENSENOVA PODLOGA LIJEVO SA PORASLOM KULTUROM DESNO _STERILNA PODLOGA

ENDO AGAR SS AGAR

Campylobacter na KARMALI AGRU

BIOKEMIJSKE HRANJIVE PODLOGE 1) DVOSTRUKI ŠEĆER PO KLIGLERU - kosi agar crvene boje, služi za ispitivanje biokemijskih osobina bakterija

2) SIMMONSOVA (CITRAT) PODLOGA- kosi agar zelene boje u epruveti

PODLOGA ZA POSEBNE NAMJENE MUELLER HINTONOV agar

PRIPREMA BAKTERIOLOŠKIH HRANJIVIH PODLOGA podloge u laboratoriju dolaze u dehidriranom obliku - industrijski proizvedene podloge u prahu pripremaju se po uputama proizvođača POSTUPAK PRIPREME: ODVAGA ODREĐENE KOLIČINE PRAHA OTAPANJE U DESTILIRANOJ VODI ZAGRIJAVANJE DO VRENJA uz povremeno miješanje STERILIZACIJA SMJESE PO UPUTAMA PROIZVOĐAČA RAZLIJEVANJE U sterilne Petrijeve zdjelice u sterilnoj sobi.

SMJESA ZA PRIPREMU HRANJIVOG AGARA

RAZLIJEVANJE HRANJIVIH PODLOGA U STERILNOJ SOBI

PRIBOR – ZA PRIPREMU PODLOGA

VJEŽBA: PRIPREMA HRANJIVE PODLOGE Praktični zadatak za učenike na vježbama : Pripremiti hranjivi agar po uputama sa deklaracije proizvođača PRIBOR I MATERIJAL: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Dehidrirana hranjiva podloga _hranjivi agar Žlica Digitalna vaga kuhalo Posuda za vaganje smjese Erlenmayerova tikvica Stakleni štapić Rukavice Destilirana voda Petrijeve zdjelice

POSTUPAK: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Pripremiti radno mjesto i potreban pribor Odvagati potrebnu količinu praha hranjivog agara. Prebaciti prah u tikvicu i miješanjem dodati destiliranu vodu i otopiti zagrijavanjem na električnom kuhalu. Povremeno promiješati sadržaj u tikvici Otopiti zagrijavanjem pri 100°C , kada smjesa prokuha prekinuti zagrijavanje Sterilizirati smjesu prema uputama proizvođača Razliti sterilnu smjesu u Petrijeve zdjelice (sterilna soba s UV lampama) Hlađenje podloga na sobnoj temperaturi Ako se podloge isti dan ne koriste čuvamo ih u hladnjaku na +4°°C do mjesec dana.

PONOVIMO UKRATKO: Bakteriološke hranjive podloge služe za uzgoj mikroorganizama u laboratoriju Dolaze u dehidriranom obliku i pripremamo ih po uputama proizvođača Podloge moraju biti sterilne pa ih nakon pripreme steriliziramo Po konzistenciji ih dijelimo na tekuće, polutekuće i krute. Po namjeni se dijele na: diferencijalne, selektivne, transportne, biokemijske, za čuvanje bakterijskih kultura i hranjive podloge za posebne namjene.

HVALA NA PAŽNJI ! Ines Mišetić Lašić