Mutace genu pro Connexin 26 jako vznamn pina

  • Slides: 21
Download presentation
Mutace genu pro Connexin 26 jako významná příčina nedoslýchavosti Petr Lesný 1, Pavel Seeman

Mutace genu pro Connexin 26 jako významná příčina nedoslýchavosti Petr Lesný 1, Pavel Seeman 2, Daniel Groh 1 1 ORL klinika UK 2. LF a FN Motol Subkatedra dětské ORL IPVZ Přednosta doc. MUDr. Zdeněk Kabelka 2 Klinika dětské neurologie DNA laboratoř UK 2. LF a FN Motol

Obsah • Prelingvální poruchy sluchu • Connexin 26 • Typická anamnéza a vyšetření •

Obsah • Prelingvální poruchy sluchu • Connexin 26 • Typická anamnéza a vyšetření • Naše výsledky

Poruchy sluchu • Nejčastější a nejzávažnější (WHO) smyslová vada u lidí • Prelingvální, perilingvální

Poruchy sluchu • Nejčastější a nejzávažnější (WHO) smyslová vada u lidí • Prelingvální, perilingvální a postlingvální • Prelingvální hluchota 1: 1000 případů • Více než 50% na genetickém základu (např. geny POU 3 F 4, myosin 7 A, otoferlin, pedrin, connexin 31)

Prelingvální poruchy sluchu Vrozené (~60%) Spojené s určitým syndromem (~30%) Získané (40%) Nesyndromové (~70%)

Prelingvální poruchy sluchu Vrozené (~60%) Spojené s určitým syndromem (~30%) Získané (40%) Nesyndromové (~70%) Autozomálně recesivní Autozomálně dominantní (dnes již (80 -85%) X-vázané a >30 genů) (~15%) mitochondriální (<5%) Mutace genu GJB 2 kódujícího connexin 26 (80%)

Connexin 26 (Cx 26) • Connexiny – Membránové proteiny – Součásti gap-junction (je tvořena

Connexin 26 (Cx 26) • Connexiny – Membránové proteiny – Součásti gap-junction (je tvořena 6 molekulami connexinu) – Umožňují pohyb malých molekul a iontů mezi buňkami • Connexin 26 – tkáňově specifický (spojuje navzájem podpůrné bb. v hlemýždi)

Connexin 26 (Cx 26) Na+-specifické iontově selektivní kanály Iontově selektivní kanály tvořené Connexinem 26

Connexin 26 (Cx 26) Na+-specifické iontově selektivní kanály Iontově selektivní kanály tvořené Connexinem 26 Umožňuje recirkulaci iontů K+ zpět do endolymfy v průběhu zvuku repolarizaci buněk

Mutace genu pro Cx 26 • Gen GJB 2 na chromosomu 13 q 11

Mutace genu pro Cx 26 • Gen GJB 2 na chromosomu 13 q 11 • Jsou zodpovědné za 60 -80% AR vrozených nesyndromických ztrát sluchu za 20 -30% prelingválních ztrát sluchu • Četnost heterozygotů (nosičství) v Evropě je 1: 31 (stejně jako například CF) • Není závislost mezi typem mutace Cx 26 a závažností ztráty sluchu • Prokázán founder efekt (existence hypotetického společného předka) Van Laer, 2001 http: //www. iro. es/cx 26 deaf. html

Heterozygoti pro Connexin 26/30 • Mutace v genu GJB 6 kódujícím Connexin 30 je

Heterozygoti pro Connexin 26/30 • Mutace v genu GJB 6 kódujícím Connexin 30 je druhá nejčastější genetická příčina vrozené prelingvální nesyndromické poruchy sluchu • Heterozygoti pro Connexin 26 (odpovídající diagnostickým kritériím) mohou mít mutaci Connexinu 30 del Castillo, 2002

Genetické vyšetření mutací Cx 26 • Ve světě dnes již běžné • „Malý gen“

Genetické vyšetření mutací Cx 26 • Ve světě dnes již běžné • „Malý gen“ umožňuje rutinní genetické vyšetření • Některé mutace jsou velmi časté (mutace 35 del. G je nacházena v Evropě až v 80% případů) • Genetické poradenství, prenatální diagnostika, prognóza pro CI?

Typická anamnéza RA: autozomálně recesivní typ vady: obě pohlaví jsou postižena stejně často rodiče

Typická anamnéza RA: autozomálně recesivní typ vady: obě pohlaví jsou postižena stejně často rodiče mívají sluch normální sourozenci mohou být postižení (25%)

Typická anamnéza OA: Vyloučení získaných vad • kongenitální infekce (rubeola, VZV, CMV, EBV, toxoplasmóza,

Typická anamnéza OA: Vyloučení získaných vad • kongenitální infekce (rubeola, VZV, CMV, EBV, toxoplasmóza, lues apod. ) • asfyxie u porodu, porodního traumatu, prolongované UPV, Rh inkompatibilita apod. • kraniofaciální malformace • ototoxické léky • vady spojené s genetickými syndromy • u nedonošenců pod 1500 g je časté krvácení do labyrintu

Typický nález Vyšetření svědčí pro bilaterální percepční ztrátu sluchu… otomikroskopie: vyloučeny anomálie zevního zvukovodu

Typický nález Vyšetření svědčí pro bilaterální percepční ztrátu sluchu… otomikroskopie: vyloučeny anomálie zevního zvukovodu tympanometrie: křivka „A“ OAE: nevýbavné audiometrie: křivka plochá nebo klesající (největší ztráta je na 4000 -8000 Hz)

Diagnostika • ORL a pediatrické vyšetření – zařazující kritéria – vylučující kritéria • Genetická

Diagnostika • ORL a pediatrické vyšetření – zařazující kritéria – vylučující kritéria • Genetická konzultace se sestavením rodokmenu, informovaný souhlas • Odběr krve či použití krevních skvrn – „Guthrie karet“ • DNA vyšetření nejčastějších mutací – 35 del. G • Sekvenování genu pro nalezení méně častých mutací • Genetická konzultace - dovyšetření rodičů, sdělení výsledků

Závěr 1. Poměr mezi vrozenými a získanými prelingválními ztrátami sluchu stoupá 2. 20 -30%

Závěr 1. Poměr mezi vrozenými a získanými prelingválními ztrátami sluchu stoupá 2. 20 -30% prelingválních ztrát sluchu je způsobeno mutací genu pro Connexin 26 3. Vyšetření mutací Cx 26 v ČR? 4. Umožnění genetického poradenství i prenatální diagnostiky

První výsledek v ČR: (2001) prenatální diagnostika v rodině pacienta s kochleárním implantátem CI

První výsledek v ČR: (2001) prenatální diagnostika v rodině pacienta s kochleárním implantátem CI Pavel. Seeman@lfmotol. cuni. cz

Molekulárně genetické vyšetření genu Cx 26 1. Potvrzení či vyloučení hlavní mutace 35 del.

Molekulárně genetické vyšetření genu Cx 26 1. Potvrzení či vyloučení hlavní mutace 35 del. G • • fragment analýza - přítomnost fragmentu o 1 bp kratšího (většina postižených jsou homozygoti) nebo přímé sekvenování genu 2. V případě „nehomozygota“ pro 35 del. G • dovyšetření všech dalších mutací pomocí sekvenování celého kódujícího úseku ve 2 PCR fragmentech 3. Vyšetření rodičů a sourozenců pro zjištění původu mutace Pavel. Seeman@lfmotol. cuni. cz

Kritický úsek sekvence genu Cx 26 normální DNA sekvence - 6 x. G 1

Kritický úsek sekvence genu Cx 26 normální DNA sekvence - 6 x. G 1 G často u pacientů chybí Pavel. Seeman@lfmotol. cuni. cz

První vyšetření v ČR a první potvrzený pacient Neslyšící dítě Otec Matka Plod Pavel.

První vyšetření v ČR a první potvrzený pacient Neslyšící dítě Otec Matka Plod Pavel. Seeman@lfmotol. cuni. cz

Zpráva 1. Neslyšící pacient je homozygotem pro nejběžnější mutaci genu pro Cx 26: 35

Zpráva 1. Neslyšící pacient je homozygotem pro nejběžnější mutaci genu pro Cx 26: 35 del. G 2. Rodiče jsou heterozygoti pro tuto mutaci, 25% riziko postižení dalších potomků 3. Plod je zdravý homozygot - neměl by být postižen poruchou sluchu závislou na mutaci Cx 26 Pavel. Seeman@lfmotol. cuni. cz

Druhý výsledek: vyšetření pacientů s kochleárními implantáty a kongenitální etiologií poruchy sluchu (2002) Předpoklad

Druhý výsledek: vyšetření pacientů s kochleárními implantáty a kongenitální etiologií poruchy sluchu (2002) Předpoklad častého výskytu mutace. Celkem vyšetřeno (II/2002) 29 pacientů. bez mutace: 13 pacientů heterozygoti: 2 pacienti homozygoti pro Cx 26: 14 pacientů

Děkuji za pozornost

Děkuji za pozornost