MODUL XII MIKROBIOLOGI TANAH Oleh M Adhiraga Pratama

MODUL XII MIKROBIOLOGI TANAH Oleh : M. Adhiraga Pratama

Praktikum 6 amonifikasi Mikrobiologi tanah Siklus nitrogen Enumerasi nitrifikasi denitrifikasi Fiksasi nitrogen

Siklus nitrogen

1. amonifikasi Tujuan Memperlihatkan terlepasnya amoniak dari senyawa organik yang mengandung nitrogen Alat dan bahan Tiga kultur bakteri Tanah subur dan tak subur Reagen nessler Tujuh tabung reaksi dengan pepton 4 % Pembakar bunsen, pipet, jarum inokulasi, spot plate

1. amonifikasi enam tabung reaksi dilabeli dengan nama bakteri dan jenis tanah, satu tabung sebagai kontrol enam tabung diinokulasi dengan bakteri + 0. 1 gram sampel tanah Inkubasi 7 hari 25 o C Uji amonia : pada hari 3, 5, 7. Pada tempat uji, dicampurkan satu tetes larutan nessler dan satu loop kultur

1. amonifikasi warna Tidak ada perubahan Kuning muda Kuning tua 0 +1 +2 hasil Tidak ada ammoniak Sedikit ammoniak Sedang ammoniak Endapan coklat +3 Banyak ammoniak

2. nitrifikasi Tujuan memperlihatkan konversi enzimatik ammoniak menjadi nitrat oleh mikroorganisme Alat dan bahan Sampel tanah asam dan tanah basa Dua elenmeyer berisi kaldu ammonium sulfat dan dua elenmeyer berisi kaldu nitrat Reagen nessler, difenilamin, tromsdorf, asam sulfat pekat dan asam sulfat cair Pembakar bunsen, pipet, spot plate, pengaduk

2. nitrifikasi Setiap elenmeyer ditandai dengan medium dan jenis tanah yang digunakan Tambahkan 0. 1 gram sampel tanah ke elenmeyer, kocok perlahan Inkubasi 7 hari 25 o C

2. nitrifikasi + reagen nessler → kuning, + ammoniak Kaldu ammonium sulfat + reagen nessler +asam sulfat cair → biru hitam, , + nitrit analisis + reagen nessler → kuning, + nitrit Kaldu nitrat + reagen difenilamin + asam sulfat pekat → kuning, + nitrat

3. denitrifikasi Tujuan Menunjukan reduksi nitrat menjadi gas nitrogen Alat dan Bahan dua kultur bakteri Tanah subur dan tak subur Empat tabung reaksi dengan tabung durham Pembakar bunsen, jarum inokulasi

3. Denitrifikasi tabung reaksi dilabeli dengan nama bakteri dan jenis tanah enam tabung diinokulasi dengan bakteri + 0. 1 gram sampel tanah Inkubasi 14 hari 25 o C + ada gas dalam tabung durham - tidak ada gas dalam tabung

4. Fiksasi nitrogen Tujuan Menunjukan fiksasi nitrogen oleh organisme simbiotik dan non simbiotik Alat dan Bahan Sampel tanah basa, tanaman kacang-kacangan segar Satu elenmeyer berisi mannitol dan cawan petri berisi mannitol Metilen biru, safranin, kristal violet dan iodine Bunsen, jarum inokulasi, kaca preparat dan lampu ultraviolet

4. Fiksasi nitrogen Isolasi azotobacter Tambahkan sampel tanah kedalam elenmeyer dan inkubasi 7 hari suhu ruang Ambil lapisan film pada kultur, transfer kedalam cawan petri berisi mannitol dan inkubasi 4 -6 hari suhu ruang Letakan dua loop koloni yang tampak berbeda pada kaca preparat, dengan lampu ultraviolet, amati ada fluorescens hijau atau tidak Pewarnaan gram

4. Fiksasi Nitrogen Isolasi rhizobium Bilas nodul akar tanaman Nodul diremukan dengan kaca preparat Fiksasi satu loop materi isi nodul pada kaca preparat Pewarnaan dengan metilen biru, diamati di mikroskop dengan minyak imersi

5. Enumerasi Tujuan Mengetahui flora dalam tanah Menentukan jumlah bakteri dan jamur dalam tanah Alat dan bahan Satu gram sampel tanah dan elenmeyer berisi 99 ml air 4 cawan berisi agar glycerol, 4 cawan berisi agar sabouroud , 4 cawan berisi agar nutrisi dan 2 elenmeyer berisi 99 ml air Bunsen, pipet, colony counter, batang gelas L

5. Enumerasi glycerol 10 -3 1 99 ml H 20 tanah sabouroud Agar nutrisi 10 -4 10 -2 10 -5 2 99 ml H 20 3 99 ml H 20 10 -3 10 -4 10 -6 10 -4 10 -5 10 -6 10 -7 10 -5