Minimal Residual Disease bepaling bij CLL Waarom zou

Minimal Residual Disease bepaling bij CLL Waarom zou je het doen? Hoe zou het kunnen?

overleving (%) Overleving na Eerstelijn behandeling met chemotherapie met / zonder rituximab (anti-CD 20) maanden

Overleving na donor (allogene) stamceltransplantatie

Waarom werkt allogene stamceltransplantatie ? • Donor T-cel anti-CLL effect • Treedt vaak op na – verminderen afweeronderdukkende medicatie – bij optreden graft-versus-host ziekte – na donor lymfocyt infusie (DLI)

. Gribben J G et al. Blood 2005; 106: 4389 -4396 © 2005 by

HOVON 88 CLL Allogeneic stem cell transplantation after reduced intensity conditioning for high-risk relapsed or refractory CLL. A prospective multi-center phase II study

MRD bij CLL drie reeksen vergeleken met kappa/lambda/CD 19/CD 5 Rawstron, Leukemia 2007

werkwijze validatie • 7 patiënten casus – nieuwe CLL – MRD – zonder CLL • negen antistof combinaties • verstuurd naar 10 labs in 9 verschillende landen

uitkomsten • laagste inter-lab variatie en minste valspositieve uitslagen met: – CD 20 / CD 38 / CD 19 / CD 5 – CD 22 / CD 81 / CD 19 / CD 5 – CD 43 / CD 79 b / CD 19 / CD 5

waarom niet CD 23 ? • normale CD 5 positieve B cellen zijn ook CD 23 positief • CD 23 komt ook voor op subpopulaties van CD 5 negatieve normale B cellen

MRD bij CLL CD 20, CD 38, CD 19 en CD 5

CD 20 en CD 38 expressie • CD 20 – rijpere B precursors – rijpe B cellen • CD 38 – – – geactiveerde T cellen geactiveerde B cellen allerlei precursors plasmacellen NK cellen

waarom CD 20 en CD 38 bij MRD ? B precursors CD 19 gated normale rijpe B cellen CLL

volstaat deze reeks ? ofwel, onderscheidt CD 20 en CD 38 expressie CLL cellen altijd van normale rijpe en precursor B cellen ?

CD 20 soms op (rijpere) B cel precursors = B cel precurors

CD 38 soms hoog bij CLL CD 19 gated geactiveerde CLL R 2 B cel precurors

conclusie • reeks met CD 38 en CD 20 volstaat niet in alle gevallen

MRD bij CLL CD 22, CD 81, CD 19 en CD 5

expressie van CD 81 en CD 22 • CD 81 – T cellen – B cellen – Monocyten (zwak) • CD 22 – voorloper en rijpe B cellen

B-cel CD 81 en CD 22 expressie CD 19 gated CLL

MRD met CD 22 en CD 81 R 7 = CLL (moderate CD 22) R 8 = CLL (moderate CD 22, dim CD 81)

conclusie • reeks met CD 22 en CD 81 levert in vrijwel alle gevallen bruikbare MRD informatie

MRD bij CLL CD 79 b, CD 43, CD 19 en CD 5

expressie van CD 79 b en CD 43 • CD 79 b – precursor B cellen (m. n. cytoplasmatisch) – rijpe B cellen • CD 43 – – – T cellen geactiveerde B cellen plasmacellen monocyten granulocyten macrofagen

MRD met CD 79 b en CD 43 CLL rijp B B cel precursors

Conclusie CD 79 b/CD 5/CD 43 • zelfs bij lage CD 5 expressie onderscheidend van normale B cellen

Conclusie CD 79 b/CD 5/CD 43 • zelfs bij lage CD 5 expressie onderscheidend van normale B cellen • buis niet informatief indien er geen duidelijke populatie met CD 5 en CD 79 b is

kunnen normale B cellen (rijp en precursor) CD 5 positief zijn ? T • op geactiveerde B cellen

kunnen normale B cellen (rijp en precursor) CD 5 positief zijn ? • op geactiveerde B cellen • op precursors ? – (5 -7% van de CD 19+ cellen in kind BM is CD 5+)

validatie van deze en andere MRD methodes • 141 data files, naar 10 internationale labs – alleen normale cellen (n=40) – 0. 00001 -0. 01% CLL (n=32) – 0. 01 -0. 1% CLL (n=69) Rawstron, Leukemia 2007

validatie • 141 data files, naar 10 internationale labs – alleen normale cellen (n=40) – 0. 00001 -0. 01% CLL (n=32) – 0. 01 -0. 1% CLL (n=69) • inter-operator variabiliteit en fout-positieve metingen ‘t minst bij: – CD 79 b / CD 43 – CD 81 / CD 22 – CD 38 / CD 20 Rawstron, Leukemia 2007

analyse-SOP verhoogt precisie en verlaagt fout-positieve uitslag Rawstron, Leukemia 2007

flow MRD correleert met Q-PCR boven 0. 01% Rawstron, Leukemia 2007

detectie limiet • minimaal 0. 01% MRD detecteren • die 0. 01% moeten minimaal 50 events zijn • hoe? – minimaal 500. 000 leukocyten meten – SOP gebruiken Rawstron, Leukemia 2007

Dank voor de aandacht ! CLL or n o CL L?