Mikroszkpia Klnbz spci mikroszkpok s festsi eljrsok Ksztette

Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás

Mikroszkópia története n n n Mikroszkóp: mikron = kicsi szkopein = nézni Mikroszkópia: szemmel láthatatlan tárgyak mikroszkópos vizsgálata Első mikroszkóp: ~ 1600: Hans Lippershey, Hans Janssen, Zacharias Janssen

Mikroszkópok fajtái: n Optikai elméletet használó: q q q Mintán áthaladó/visszaverődő sugarakat egy optikai rendszer felnagyítja Binokuláris/szimpla Fajtái: n összetett fénymikroszkópok (max kb. 1500 X, elméleti felbontóképesség 0, 2 mikrométer ), n n szetereomikroszkópok, Elektronmikroszkópok (vákuum kell)

Sztereomikroszkóp Elektronmikroszkóp

Mikroszkópok fajtái n Speciális fénymikroszkópok: q q q q Ultraibolya-mikroszkóp Ultramikroszkóp Fáziskontraszt-mikroszkóp Lumineszcencia-mikroszkóp Konfokális pásztázó mikroszkóp Polarizációs mikroszkóp Binokuláris mikroszkóp Sztereomikroszkóp

Mikroszkópok fajtái n Elektronmikroszkópok: q q Pásztázó elektronmikroszkóp Transzmissziós elektronmikroszkóp

Elektronmikroszkóp

Mikroszkópok fajtái: n Pásztázószondás mikroszkópok q mikroszkopikus sugárszondát használnak a felület feltérképezésére : szondasugár + detektor: kölcsönhatás alapján: n n n n Atomerő mikroszkóp Elektrosztatikus mikroszkóp Mágneses erőmikroszkóp Alagútelektron-mikroszkóp Közeli mező optikai mikroszkópia Pásztázó elektronmikroszkóp Egyéb: akusztikus mikroszkóp: q Hanghullámmal, minta hangvezetését méri

Fénymikroszkópia n n Látható fény segítségével Optikai lencse használatával Felfogó: szem, fotolemez, digitális képalkotó eszköz Korlátok: q q q sötét vagy erős fényvisszaverésű vizsgálandó felület kell Diffrakció miatt: max felontóképesség 0, 2 mikrométer Fókuszsíkól kieső pontok csökkentik a kép tisztaságát

Egy eljárás menetének bemutatása mikroorganizmusokra: n 1. Tárgylemez tisztítása: zsírtalanítás 96%-os alkohollal, majd hőkezelés (max 60 -70 °C-on) n 2. Preparátum rögzítése (sejtek megtapadása a tárgylemezen) q Sok rögzítési eljárás ismeretes; egyik legegyszerűbb: hővel való rögzítés n n Megjegyzés: finom ultracellulális részletek vizsgálatakor nem alkalmazható, mert a sejt ezen részében durva változásokat okoz a hő 3. Festés: egyszerű vagy összetett festési eljárással q q q Pozitív vagy negatív festés Egyszerű: Polikróm festés, mikroanalitikai festések és indikáló festések Összetet: Differenciáló festések

Festési eljárások n n Láthatóbbá tehetőek velük a minták Fluoreszcens festékek: q q n Immunfestés Zöld fluoreszcens fehérje p. H alapján (mikroorganizmusok festéséhez): q Bázikus színezőanyagok (metilénkék, fukszin, malahitzöld, kristályibolya, neutrálvörös) q q Savas színezőanyagok (eozin) Semleges színezőanyagok (rhodamin B)

Gram-pozitív baktérium: Gram-negatív baktérium:

Konkrét alkalmazás: mikroorganizmusok kimutatása: n A megfelelően tárgylemezre 1 csepp vizet Bacillus cereus előkészített és Pseudomonas fluorescens n n cseppentünk Ebben szuszpendálunk 1 -1 kacsnyit az előre kitenyésztett baktériumtenyészetekből (Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens) Alapos elkeverés, és a tárgylemezen minél vékonyabb rétegben történő szélesztés után a készítményt láng felett rögzítjük. Kihűlés után a festést az alábbi séma szerint végezzük: q q q q Festés genciánibolya-oldattal 1 percen át Vizes öblítés Pácolás Lugol-oldattal 1 percen át Vizes öblítés Színtelenítés 96 %-os alkohollal 0, 5 percen át Vizes öblítés Kontrasztfestés szafraninnal 1 percen át Vizes öblítés, szárítás

n n n A készítményt immerziós objektívvel vizsgáljuk. Benne a Bacillus cereus baktériumok kék színű (Grampozitív), a Pseudomonas fluorescens sejtek pedig piros színű (Gram-negatív) pálcikaként mutatkoznak. A preparátum értékelésekor tekintettel kell lenni arra a tényre, hogy a festés eredménye függ a tenyészet korától is. Gram-pozitív baktériumok idősebb tenyészete néha Gram-negatív jelleget mutathat. Bacillus cereus Pseudomonas fluorescens

Források: n Írott források: q q q Bruno P. Kremer – A mikroszkóp használata, Geobook Hungary Kiadó, 2008. Öveges József- A mikroszkóp és használata http: //www. hefop. u_szeged. hu/hefop_kk/doc uments/Tananyag/EKF/Okologiai_es_kornye zetelemzesi_komplex_terepgyak. pdf http: //hu. wikipedia. org/wiki/Mikroszk%C 3%B 3 pia http: //www. taki. iif. hu/hungarian/soilbio/halbrit tera/mikro. html picasso. elte. hu/microscopy/pozsgai 2005. ppt

Források: n Képek: q q q q q archive. microbelibrary. org textbookofbacteriology. net makszutov. hu auroscience. hu alphaoptika. hu mikroszkop. network. hu elektro-optika. hu mokkka. hu sirbuday. hu