Mikroskopska dijagnostika Mikroskop i mikroskopiranje Pripremila Ines Mieti

Mikroskopska dijagnostika Mikroskop i mikroskopiranje Pripremila: Ines Mišetić Lašić, Zdravstvena škola Split

UVOD • Prisjetimo se: ISHODI koje smo do sada usvojili • Važnost mikrobiološke dijagnostike – iz biološkog uzorka izolirati i identificirati patogenog uzročnika bolesti! • Ponovimo: • Koji je postupak i princip bakteriološke obrade uzoraka ? (navesti redosljed obrade i bitne metode i testove identifikacije patogenih vrsta)

Postupak mikrobiološke obrade uzoraka u svrhu identificiranja patogene vrste • Pravilno uzimanje bioloških uzoraka i transport do mikrobiološkog laboratorija • Izrada direktnih preparata i mikroskopiranje • Nasijavanje na sterilne hranjive podloge i inkubacija u termostatu 24 sata. • Očitavanje porasle kulture na podlogama identifikacija morfologije kolonija. • Presijavanje sumnjivih kolonija za dobivanje čiste kulture. • Izrada specifičnih testova za identifikaciju bakterijske vrste • Izrada seroloških testova za dokaz antigene grupe bakterije • Izrada biokemijskih testova za dokaz fizioloških osobina bakterije • Izrada testa antibiograma identificirane bakterijske vrste • Očitavanje antibiograma i izdavanje nalaza

Mikroskopska dijagnostika • Velika važnost u mikrobiološkoj dijagnostici • Koriste se nativni i obojeni preparati Koristeći mikroskop dokazuje se : 1. Prisustvo patogene bakterije u direktnom preparatu biološkog uzorka(npr. likvor) 2. Oblik, pokretljivost i veličina stanica živih većih mikroorganizama u nativnim preparatima. 3. Morfologija i građa bakterijske stanice u obojenim preparatima.

MIKROSKOP I MIKROSKOPIRANJE

Što je mikroskop? • Naziv mikroskop potječe od grčke riječi mikros=malen, sitan i skopein=gledati • Optički uređaj kojim možemo vidjeti povećanu sliku sitnih predmeta (mikroorganizmi, stanice) i uočiti njihovu građu, dijelove stanica

Postoje jednostavni i sastavljeni mikroskopi: • JEDNOSTAVNI MIKROSKOP ili lupa (povećalo) sastoji se od jedne leće ili jednog sustava leća • SASTAVLJENI MIKROSKOP vrlo složeno građen optički uređaj s više leća ili dva optička sustava (okulara i objektiva)

Vrste mikroskopa • • • Svjetlosni mikroskop Elektronski mikroskop Fluorescentni mikroskop Mikroskop za biološka istraživanja Mikroskop s tamnim vidnim poljem Mikroskop sa svijetlim vidnim poljem

SVJETLOSNI MIKROSKOP Sastoji se od optičkog i mehaničkog dijela OPTIČKI DIO čine: okular, objektiv i uređaj za osvjetljavanje promatranog predmeta

MEHANIČKI DIO- stativ čine: • Masivna podloga (podnožje) • Stalak (koji je spojen s podlogom pomoću nagibnog zgloba) • Tubus (u gornjem dijelu umetnuti okulari, a na donjem revolver s objektivima) • Makrovijak i mikrovijak za pomicanje tubusa ili stolića Pomicanjem makrovijka tražimo sliku, dok mikrovijak služi za izoštravanje slike. • Vijci za pomicanje preparata nalaze se na stoliću • Vijak za pomicanje kondenzora nalazi se ispod stolića

OKULARI OBJEKTIVI MAKROVIJAK

Optički dio mikroskopa • Važan dio mikroskopa i o njima ovisi kvaliteta mikroskopa OKULAR • Optički dio mikroskopa koji je utaknut u tubus na njegovom gornjem kraju. Naziva se okular zato što kroz njega gledamo okom u mikroskop. • kovinski šuplji valjak u koji su umetnute dvije leće: gornja ili očna leća i donja ili sabirna leđa. • Na okularu arapskim brojkama označeno koliko puta povećava sliku (10 x ili 15 x) • Sabirna leća povećava vidno polje mikroskopa • Svrha okulara: vidjeti sliku promatranog predmeta

OBJEKTIV • • • onaj dio optike mikroskopa koji je pri mikroskopiranju okrenut prema promatranom predmetu (objektu) pa se zato i naziva objektiv. Kovinski šuplji valjak u kojem se nalazi sklop centriranih optičkih leća Pričvršćen na revolveru koji se može okretati i postaviti željeni objekt u optičku os Svaki je objektiv označen arapskim brojkama koje pokazuju povećanje objektiva (10 x, 40 x, 100 x) Svrha objektiva: dobivanje realne, povećane i obrnute slike promatranog predmeta Ukupno povećanje slike= povećanje objektiva x povećanje okulara

S obzirom na način upotrebe razlikujemo ove vrste OBJEKTIVA: SUHI OBJEKTIVI • Služe za mala i srednja povećanja slike 10 x i 40 x, rabe se kod mikroskopiranja nativnih preparata IMERZIJSKI OBJEKTIVI • Koristimo ih kod mikroskopiranja obojenih preparata kada su nam potrebna jaka povećanja 100 x Ø pri uporabi suhih objektiva između njihovih frontalnih leća i pokrovnice nalazi se zrak, za mikroskopiranje preparata kojima nije potrebno jako svjetlo Ø Prilikom uporabe imerzijskog objektiva koristimo imerzijsku tekućinu (cedrovo ulje), za mikroskopiranje obojenih preparata - jako svjetlo

Uređaj za osvjetljavanje promatranog predmeta • Najčešći način je prolazak svjetlosnih zraka odozdo kroz promatrani predmet • Sastoji se od: zrcala, kondenzora, iriszaslona i ležišta za filtre • Zrcalo- usmjerava zrake prema promatranom predmetu, usađeno u stalak mikroskopa, jačina osvjetljenja se namješta od 1 do 10. • Kondenzor- sastoji se od dvije ili tri leće, posebnim vijkom možemo ga spuštati i podizati, svrha je da dovoljno jako osvijetli promatrani predmet

UPORABA KONDENZORA • Najpoznatiji kondenzori -Abbeovi kondenzori • Fokusiranje s kondenzorom: treba gledati u okular i istodobno spuštati ili dizati kondenzor dok vidno polje postane jednoliko osvijetljeno • Slabiji objektiv(malo povećanje) => odmaknuti kondenzor od preparata prema dole. Dobije se manje svjetla. • Jači objektiv(veliko povećanje) => primaknuti kondenzor prema gore. Tako se dobije više svjetla.

Iris- zaslon • Smješten ispod kondenzora, njime određujemo količinu svjetlosnih zraka • Kod objektiva malog povećanja (10 i 40 ×) suziti otvor iris-zaslona. Tada prolazi manje svjetlosti. • Kod imerzijskih objektiva potpuno otvoriti iris-zaslon, da se dobije više svjetlosti. Ležišta za filtre • Jedan filter od mutnog stakla, a drugi od svijetlomodrog kobaltovog stakla • Prvi služi za dobivanje difuzne svjetlosti, a s drugim umjetnu rasvjetnu možemo učiniti sličnu danjoj

IRIS - ZASLONA

Postupak mikroskopiranja sa objektivima 10 i 40 x • Staviti objektiv u radni položaj i namjestiti pravilno osvjetljeno vidno polje pomoću ogledala, kondenzora i irisa. • Na stolic staviti preparat tako da dio preparata koji promatramo bude ispod leće objektiva • Spustiti objektiv do kraja da se nasloni na preparat. • Gledajući kroz okular podizati tubus makrovijkom dok ne ugledamo sliku, izoštriti sa mikrovijkom i podesiti osvjetljenje.

Postupak mikroskopiranja pomoću imerzijskog objektiva(veliko povećanje) 1) S pomoću slabog objektiva 10 x namjestiti preparat tako da slika dođe u sredinu vidnog polja 2) Podignuti tubus tako da razmak između donjeg ruba objektiva i preparata bude približno 2 cm 3) Staviti kapljicu imerzijske tekućine na pokrovnicu tako da bude točno ispod frontalne leće objektiva 4) Pokretom revolvera namjestiti imerzijski objektiv 5) Desnom rukom pomalo pomicati veliki vijak spuštajući tubus dok frontalna leća ne dotakne imerzijsku tekućinu 6) Nakon toga podignuti tubus 1 mm, a zatim ga ponovno spuštati malim vijkom dok se ne pojavi slika 7) Izoštriti sliku pomoću malog vijka i podesiti jače osvjetljenje.

Zadatak za učenike • Nakon što proučite prezentaciju molim vas istražite u literaturi ili na internetu : • Elektronski mikroskop (osobine i namjena te razlika između elektronskog i svjetlosnog mikroskopa) ? • Molim odgovor poslati u virtualnu učionicu Zdravstvene škole. Hvala na pažnji! Nastavnik: Ines Mišetić Lašić

Pitanja za ponavljanje i vrednovanje • • • Navedi značaj mikroskopske dijagnostike u mikrobiologiji? Što se koristi u toj vrsti dijagnostike? Nabroji mehaničke dijelove mikroskopa? Nabroji optičke dijelove mikroskopa? Objasni ulogu kondezora? Navedi kakvo osvjetljenje se koristi kod mikroskopiranja sa velikim povećanjem mikroskopa?

Kraj Hvala na pažnji.