Microscopie photonique PRSENTATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE UTILISATION DU

Microscopie photonique § PRÉSENTATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE § UTILISATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE § AUTRES TYPES DE MICROSCOPE PHOTONIQUES § Microscopie en fluorescence § Microscopie en contraste de phase § Microscopie en lumière polarisée

PRÉSENTATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE I. Partie mechanique: I. a Parties statiques § § § 1 : La potence 2 : Pied ou socle 3 : Platine(souvent avec un dispositif qui permet de déplacer la lame) I. b Parties mobiles § § § 4 : Vis macromètrique (grands déplacements) 5 : Vis micromètrique (déplacements fins) 6 : Vis de déplacement avant – arrière(vernier) 7 : Vis de déplacement droite – gauche ( vernier ) 8 : Vis de déplacement haut-bas du condenseur III. Parties optiques § § § 9 : Oculaire 10 : Porte oculaire 11 : Revolver 12 : Objectifs (moyen x 10, fort x 40 ou plus, parfois immersion x 100) 13 : Préparation ( lame ) IV. Éclairage § § § 14 : Condenseur 15 : Diaphragme 16 : Porte filtre 17 : Lampe 18 : Interrupteur

UTILISATION DU MICROSCOPE PHOTONIQUE A) PRÉPARATION DU MICROSCOPE 1) Installer le câble électrique et brancher l'appareil. 2) Remonter le tube optique et mettre le faible grossissement (X 10). 3) Ouvrir le diaphragme. B) OBSERVATION AU FAIBLE GROSSISSEMENT 1) Placer la lame sur la platine (la préparation doit être au centre du trou). La fixer avec les valets. 2) En regardant dans l'oculaire, descendre le tube optique jusqu'à ce que l'image soit nette. 3) Recher la zone intéressante et la centrer. C) OBSERVATION AU MOYEN GROSSISSEMENT 1) Faire tourner le revolver pour que le moyen grossissement (X 20) soit en face du trou de la platine. 2) Sans changer le réglage, et en regardant dans l'oculaire, descendre lentement jusqu'à ce que l'image soit nette. Centrer. D) OBSERVATION AU FORT GROSSISSEMENT 1) Relever le tube optique. 2) Faire tourner le revolver pour que le fort grossissement (X 40) soit en face du trou de la platine. 3) En regardant latéralement, descendre prudemment le tube optique de façon que l'objectif touche presque la lamelle. 4) En regardant cette fois dans l'oculaire, régler en remontant avec la vis micrométrique jusqu'à ce que l'image soit nette. E) RANGEMENT DU MICROSCOPE 1) Débrancher la prise. 2) Remonter le tube optique. 3) Enlever la lame et nettoyer la platine si nécessaire. 4) Remettre le faible grossissement.

La microscopie en fluorescence § Le phénomène de fluorescence: § certaines substances, émettent un autre de fréquence plus petite (donc moins énergétique) § ces substances sont fluorescentes si cette émission se situe dans le domaine de la lumière visible § si l'objet n'est pas naturellement fluorescent § injecter un marqueur fluorescent qui diffuse dans l'échantillon et se fixe préférentiellement dans certains sites chimiques. Ces marqueurs sont appelés fluorochromes DAPI (qui marque l'ADN et fluorescence en bleu) § protéine fluorescente verte (GFP), très utilisés en biologie.

Principe du microscope en fluorescence Fluorescences secondaire: primaire et • émettent de la lumière fluorescente par eux-mêmes, fluorescence primaire ou autofluorescence • doivent être combinés à une substance fluorescente pour émettre de la fluorescence on parle donc de fluorescence secondaire Application: • viruse, bacille Koch • acides nucleiques • fibres de colagen • fibres elastiques

La microscopie en contraste de phase § le principe du microscope à contraste de phase est de compenser le déphasage que produisent les objets de phase par l’action d’une plaque de phase. Celle-ci ramène l’état de phase à celui qui serait donné par un objet d’amplitude et transpose ainsi les contrastes de phases en contrastes d’amplitudes § l’objet transparent devient contrasté sans l’action de colorants § à chaque objectif correspond un diaphragme différent, centré sur la plaque de phase de l’objectif, et que l’on insère au niveau du condenseur Application: • etude de la cellule in vivo • les mouvements des cilles et flagelles • bande des chromosomes

Microscopie en lumière polarisée § les microscopes polarisants permettent de visualiser des objets de faible contraste § les deux rayons dus à la biréfringence peuvent interférer entre eux § un des deux rayons, en traversant l'objet à étudier, prend du retard par rapport à l'autre, et l'interférence obtenue dépend de ce retard § dans un milieu biréfringent, l'indice de réfraction dépend des directions de propagation et de polarisation du rayon lumineux § observer des images projetées en relief § Application: § fibres de colagenes § fibres musculaires § granules proteiques ou lipidiques