MICROSCOPIA 1590 Primer microscopio compuesto fue construido por

MICROSCOPIA

1590. Primer microscopio compuesto fue construido por los holandeses H. Jansen y Z. Jansen

1882 Koch utilizó colorantes de anilina para teñir microorganismos e identificó las bacterias que causan la tuberculosis y el cólera. 1908 Köhler desarrolla el microscopio de fluorescencia 1930 Lebedeff diseñó y construyó el primer microscopio de contraste interferencial. 1931 Ruska y Knoll construyen el primer microscopio electrónico 1932 Zernicke inventó el microscopio de contraste de fases. Se observan por primera vez células vivas no teñidas en detalle. 1934 Von Ardenne construye el primer microscopio electrónico de barrido

1981 Allen e Inoué perfeccionaron la microscopía óptica de contraste video-amplificada. Alberts, Bruce, Biología Molecular de la Célula (2 da. Edición, Ediciones Omega, Barcelona, 1994)

El microscopio Compuesto

El microscopio compuesto está formado esencialmente por dos lentes convergentes llamadas objetivo y ocular. La distancia focal del objetivo (f) es mucho menor que la distancia focal del ocular (f´). El objeto (O 1) se coloca a una distancia ligeramente mayor que el foco del objetivo. El objetivo forma una imagen real e invertida (O 2) que hace de objeto para el ocular y La imagen final es Invertida, virtual y Mayor respecto al objeto se sitúa entre el foco f´y el ocular, este da una imagen virtual y mucho mayor que el objeto

Microscopio compuesto: Marcha de Rayos

Partes de un Microscopio Lente Ocular Tubo Ocular Brazo Revolver Tornillo Macrometrico Objetivos Platina Pinzas Carro y sus Cremalleras Diafragma Condensador Tornillo Micrometrico Lámpara Pie o Base

ENFOQUE EN UN MICROSCOPIO COMPUESTO El objeto debe colocarse a una distancia del objetivo tal que todo sistema otorgue una distancia aproximadamente igual a la del punto próximo (25 cm), operación que se realiza mediante el enfoque y consiste en mover el objeto sobre la platina móvil en dirección vertical utilizando los tornillos macrometrico y micrométrico hasta que la imagen final se forme nítida, es decir, a una distancia igual a la del punto próximo (25 cm. )

Aumento de un Microscopio Compuesto Se define como aumento lateral de un sistema óptica a la relación entre el tamaño de la imagen y el tamaño del objeto. El aumento propio del objetivo está definido por la relación entre el tamaño de la imagen intermedia y el tamaño del objeto sujeto a examen. El aumento propio del ocular está definido por la relación del tamaño de la imagen total obtenida y el tamaño de la imagen intermedia de la construcción total.

Aumento del microscopio En términos generales se define como la relación entre el tamaño aparente de la imagen y el tamaño del objeto, o sea: Aumento (A) = tamaño aparente de la imagen tamaño del objeto Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 veces un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10 X y un objetivo de 45 X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 1 OX x 45 X = 450 X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces.

Elementos Ópticos de un Microscopio Compuesto

Apertura numérica (AN) = n X sen Se define como el producto del índice de refracción del medio (n) por el seno del semiángulo de abertura. a= n. sen La razón de utilizar un medio de mayor índice de refracción con un objetivo de inmersión en aceite es aumentar su apertura numérica. Los objetivos tienen grabados en la montura el valor de su apertura numérica.

Límite de resolución = 0, 61 X λ AN P. R. = n. sen /0, 61 P. R= 1/d función de dispersión de punto 3 D (point spread function)

Microscopios Compuestos Poseen dos lentes que producen una imagen ampliada, vertical e invertida al objeto Microscopio óptico, fotónico o corriente • Es de campo claro ya que la luz que llega perpendicular a la preparación, la atraviesa y penetra el sistema óptico, permitiendo un campo bien iluminado. Célula de Pisum, coloración: safranina-fast-green. Traqueidas del leño de Pinus

El microscopio óptico tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0. 2 µm). Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas.

Microscopio de contraste de fases Se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para espécimenes delgados, o células aisladas Phase contrast image of cultured epithelial cells using a 20 X objective

Microscopio de fluorescencia Usa luz U. V. con una longitud de onda (100 y 380 nm) menor que la luz blanca (380 a 750 nm). Esta luz excita ciertas sustancias que emiten radiaciones (mayor a 380 nm) que las hace visibles. Algunos materiales no requieren colorantes pues tienen fluorescencia propia y otros deben ser teñidos con colorante fluorescente, es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayos luminosos. Células epiteliales , triple coloración: núcleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rejo).

Microscopio electrónico Posee mejor poder de resolución y aumento que los microscopios antes mencionados. Permite visualizar la ultraestructura celular

El microscopio electrónico de transmisión (MET) tiene un limite de resolución de cerca de 2 nm. Un MET permite observar profundidades después de haber sido fijadas y teñidas con iones de metales pesados. Los electrones son dispersados cuando pasan a través de una fina sección del espécimen, y luego detectados y proyectados hacia una imagen sobre una pantalla fluorescente.

El microscopio electrónico de barrido (MEB) tiene un limite de 2 nm. El MEB permite observar la superficies de las muestras, después de haber sido fijadas y teñidas con iones de metales pesados. Con esta técnica los electrones son reflectados sobre la superficie del espécimen.

En cualquier caso la imagen que se obtiene del objeto es mayor que este Un rayo de luz puede desviarse por reflexión o refracción Los rayos de luz que divergen desde un punto de un objeto pueden hacerse coincidir con una lente convergente Los electrones pueden desviarse por campos eléctricos o magnéticos Los electrones que divergen desde un punto de un objeto pueden hacerse converger por lentes electrostáticas o magnéticas

Las diferencias El microscopio óptico Tiene una resolución hasta 200 nm La potencia amplificadora está limitada por la longitud de onda de la luz visible No se puede observar la estructura interna de las células ni átomos aislados El microscopio electrónico Resolución aprox. de 2 nm Tienen una resolución de 1. 000 veces (TEM) y 300. 000 veces (SEM) Se obtienen imágenes tridimensionales

Las aberraciones de esfericidad que se produce por la imposibilidad de una lente de reunir a los rayos de incidencia paralela en un foco puntiforme después de la refracción. Se produce porque los rayos periféricos no dan la misma imagen que los rayos centrales. Las aberraciones cromáticas se deben a que la luz blanca está compuesta por diversas longitudes de onda correspondientes a los diferentes colores. Se corrigen mediante el diafragma iris y por medio de los oculares. Diafragma: Se encuentra bajo de la platina. Consiste en un juego de láminas concéntricas o un disco con orificios de diferentes diámetros que puede girar mediante una palanca o por el borde acanalado del disco. Su función es regularla cantidad de luz que atraviesa la muestra.