Microbiologia Conjugao Bacteriana Plasmdeos DNA circular de cadeia

Microbiologia Conjugação Bacteriana

Plasmídeos ● DNA circular de cadeia dupla ● Tamanho variável ● Capacidade de replicação autónoma ● Têm uma origem de replicação ● Todos o genes para a replicação encontram-se no próprio plasmídeo

Plasmídeos Conjugativo s Não Conjugativo s

Plasmídeos Conjugativos Gene Função Tra A Codifica para a pilina, proteína da pili F Tra D Faz parte do canal por onde passa o Dna Tra S Codificam para proteínas de superfície de exclusão que impedem o contacto entre de duas células F+ Tra T

Plasmídeos Plasmídeo de fertilidade (F) Plasmídeos de resistência (R) Plasmídeos de virulência

Conjugação ● Descoberta em 1946 por Ledberg e Tatum. ● Processo natural de transferência de material genético entre bactérias.

● Está associada à presença de plasmídeos. 2 Bactérias ● Precisamos de: Dadora: -Fator F -Pili F Receptora

● Inicia-se pela fixação da Pili da bactéria dadora a receptores na parede da bactéria receptora. ● Replicação tipo círculo rolante e transferência.

● A conjugação é unidirecional. ● Cada uma das bactérias terá uma molécula de DNA de cadeia dupla. ● Ambas têm o factor F.

● Também podemos ter células Hfr – o plasmídio está integrado no cromossoma. ● A replicação também feita em círculos rolantes.

Conjugação entre bactérias resistentes a β-lactâmicos (amoxicilina) e bactérias resistentes a ácido nalidíxico

● Bactérias resistentes a β-lactâmicos: gene que confere resistência no plasmídeo R conjugativo Dador a Receptora ● Bactérias resistentes a ácido nalidíxico: gene que confere resistência no cromossoma bacteriano

● Resultado: Obtenção de bactérias resistentes a β- lactâmicos (amoxicilina) e ácido nalidíxico (transconjugantes) e bactérias resistentes a β-lactâmico ● Transferência de informação genética é unidireccional. X

Bactérias resistentes a βlactâmicos (D) Bactérias resistentes a ácido nalidíxico (R) Bactérias resistentes a β-lactâmicos e ácido nalidíxico (T)+D+R 37ºC 18 h T D+ R Meio selectivo para T Meio com βlactâmicos e ácido nalidíxico

Testes de susceptibilidade aos antibióticos ● Permitem-nos avaliar a capacidade de um antibiótico de inibir o crescimento de bactérias em cultura. ● É essencial na escolha do antibiótico a ser usado na terapia que deve ser aplicada num paciente. Na aula : - Usamos o método de difusão em agar em que a espessura do gel era de 4 mm ; - Impregnamos vários discos contendo diferentes antibióticos , em posições estratégicas de forma a podermos avaliar os diversos comportamentos da bactéria usada.

Resultados obtidos na leitura do teste Bactéria é sensível ao antibiótico usado Bactéria é resistente ao antibiótico usado Cria-se um halo transparente em volta do disco contendo o antibiótico, o que mostra que não houve crescimento bacteriano Nada acontece em volta do disco de antibiótico utilizado, ou então temos alterações perto do disco mas devido a sinergismos existentes.

Associação Amoxilina + Ácido Clavulânico deve ser o disco central , Porque ? Sinergismo de ação : Ocorre quando a ação conjunta de 2 antibióticos é mais eficaz do que a ação de cada um deles em separado. Amoxilina Beta lactâmico O seu alvo de atuação são as transpeptidases

� Ácido Clavulânico lactamases é um inibidor suicida das beta- Liga-se às beta-lactamases e inativa-as, fazendo com que estas já não atuem na Amoxilina Assim, o ácido Clavulânico pode ser cedido pela Amoxilina a cefalosporinas (por exemplo) fazendo com que uma cefalosporina que anteriormente não tinha qualquer efeito na bactéria, agora já cause alguma sensibilidade na mesma.

Visualização dos 4 fenómenos numa placa de difusão em agar Amoxilina + Ácido Clavulânic o Resistência ao antibiótico Sensibilidade ao antibiótico Sinergismo de ação

E. Teste Método de difusão em agar que permite avaliar a CMI de cada antibiótico contra a estirpe bacteriana em causa; CMI: concentração Mínima Inibitória de antibiótico necessário para inibir o crescimento bacteriano, expressa em mg/L;

Consiste na aplicação de tiras de plástico, impregnadas de antibiótico segundo um determinado gradiente de concentração, em placas de Petri de gelose de Mueller Hinton previamente inoculadas com suspensão bacterianas de 0, 5 Mac Farland;

● Após incubação durante 18 h a 24 h observa-se ou não uma zona elíptica de inibição de crescimento bacteriano (halo); ● A CMI é lida na interceção do vértice da elipse com a tira de Eteste;