Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clnica Introduo

Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica

Introdução à Microbiologia Clínica O exame microbiológico deve responder às seguintes perguntas: Exame bacterioscópico - Há bactérias presentes na amostra? Cultura - Qual? - Quais medicamentos devem ser utilizados? Provas de identificação Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Cultura de bactérias – Aspectos Gerais Coleta da amostra: n Uso de antibióticos? n Evitar contaminação da amostra n Quantidade de amostra suficiente n Transporte da amostra n Qual o sítio anatômico da coleta n Correta identificação da amostra n Em que momento deve ser feita a coleta?

Cultura de bactérias – Aspectos Gerais Semeadura: n Quais meios de cultura semear? n Como semear? Incubação: n Qual temperatura? n Quanto tempo? n Qual concentração de CO 2?

Semeadura - Técnicas de isolamento de microrganismos: técnica de esgotamento técnica de semeadura em superfície método de pour-plate

Semeadura por esgotamento

Semeadura em superfície

Semeadura – Qual meio utilizar? Mac. Conkey: seletivo e diferencial (lactose) para Gram negativos Sangue: enriquecimento e diferencial (hemólise) Tioglicolato: enriquecimento, cultura de anaeróbios estritos SS: seletivo e diferencial (lactose). Thayer-Martin: enriquecimento e seletivo

Meios de cultura e amostras biológicas Ferida cirúrgica: AS, MC, LJ e SAB Coprocultura: MC e SS Escarro: AS e MC Escarro-tuberculose: LJ Secreção nasal: AS e MC Ponta de cateter: AS Urina: CLED e MC AS: agar sangue LJ: Lowenstein-Jensen MC: Mac. Conkey SAB: Sabouraud

Condições de crescimento Oxigênio Aeróbicos estritos Anaeróbicos facultativos Anaeróbios obrigatórios Anaeróbios aerotolerantes Microaerófilas

Incubação Estufa Jarra de anaerobiose

Meios de Cultura Aspectos gerais n Cultivar e laboratório manter microrganismos n Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias n Crescimento seletivo n Demonstração de propriedades biológicas n Isolamento viáveis no

Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados n Hidrolizados de proteínas n Carboidratos n Tampões n Enriquecimento n Inibidores

Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados n Indicadores de p. H n Outros indicadores n Ágar n Substratos para a ação de enzimas

Classificação Formulação Ø Sólidos (ágar) n 1 a 2, 0 % Ø Semi-sólidos (ágar) n 0, 05 a 0, 3 % Ø Caldos n Ativação das culturas, repiques de micro-organismos, provas bioquímicas

Finalidade Meios de pré-enriquecimento n Microrganismos injuriados ¡ Ex: Água peptonada, , Caldo lactosado

Finalidade Meios de Enriquecimento n Ideal para quando há poucos micro-organismos, crescimento lento, exigentes e fastidiosos. Ø Ex: infusão de cérebro e coração (BHI), Caldo Tioglicolato Caldo tioglicolato

Finalidade Diferenciais n. Identifica micro-organismos parecidos ØEx: Ágar Sangue, Ágar Mac. Conkey

Finalidade Seletivos n Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros n Ex: Ágar Salmonella-Shigella (SS) - Isolamento Salmonella e Shigella sp Ágar Salmonella-Shigella (SS)

Finalidade Identificação n Realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos Ø Ex: Ágar Citrato, Ágar Bile-Esculina Ágar bile-esculina

Finalidade Identificação n Avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação Ø Ex: Uréia, Ágar TSI (Tríplice açucar ferro) Ágar TSI (tríplice açúcar ferro)

Meios de Transporte e Conservação n Meio Stuart n Cary Blair n Salina Tamponada n Ágar Nutriente

Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart § Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Ø Cor original do meio: Branco opalescente. Ø Não há evidência de crescimento bacteriano.

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate § Meio rico e não seletivo § Microrganismos exigentes § Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina) § Haemophilus sp. , Neisseria sp. ,

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Haemophilus sp. Neisseria sp.

Meios para Crescimento e Isolamento Thayer Martin Ágar Chocolate com Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f) e Trimetoprim

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue § § § Meio rico e não seletivo Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Mac. Conkey n Isolamento de bacilos Gram negativos (seletivo) n Inibe bactérias Gram positivas n Utilização de lactose (diferencial) Ø Lactose positiva – coloração avermelhada Ø Lactose negativa – coloração inalterada

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Mac. Conkey Salmonella. E. coli

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Mac. Conkey Klebsiella sp

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) § Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) § Tiossulfato de sódio e o citrato férrico Ø Colônias com centro negro (H 2 S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella. Ø Colônias incolores: suspeita de Shigella spp

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) Salmonella e Shigella

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient § Utilizado para semear amostras de urina § Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Ø Cor original do meio: azul claro. Ø Colônias lactose positiva: cor amarela. Ø Colônias lactose negativa: cor azul.

Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient

Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen § Base formada por ovos integrais § Isolamento primário de micobactérias. n Cor original do meio: verde claro n Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas n Negativo: ausência de crescimento

Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen

Identificação e Classificação Ágar Sangue esverdeado

Identificação e Classificação Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae) Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes) Gama-hemólise (Enterococcus faecalis)

Provas de Identificação Ágar DNAse

Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos n Ágar Mueller Hinton n Ágar Sangue

Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton § Kirby e Bauer e pelo CLSI - condições de crescimento das principais bactérias. § Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Sensível a novobiocina S. Saprophyticus Resistente S. epidermidis

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Resistente e sensível à oxacilina MRSA

Resumo dos tipos de meio e quais microorganismos costumam crescer

Meios de cultura para fungos Ágar Sabouraud (meio sólido) BHI (meio líquido) Semeadura: em superfície Incubação: temperatura de 25 a 30 graus por até 4 semanas.

Agar Sabouraud