Manejo de evidencias forenses para anlisis de ADN

Manejo de evidencias forenses para análisis de ADN Dr. Gustavo A. Penacino Unidad de Análisis de ADN Colegio Oficial de Farm. y Bioquímicos www. adn. ac Sociedad Latinoamericana de Genética Forense www. slagf. org Fundacion INGEN – Investigaciones genéticas www. ingen. org. ar

Obtención de las Evidencias. n n n Constituye el punto crítico para la resolución de una causa judicial. Existen recomendaciones internacionales para la manipulación, transporte y conservación de las evidencias (www. slagf. org). Cualquier manipulación inadecuada permitirá a la defensa invalidar los resultados del análisis.

Tratamiento de la ESCENA DEL CRIMEN.

Sangre n n Fue históricamente la fuente de ADN más común y eficiente. Los criterios de conservación han cambiado, simplificándose: pequeñas cantidades a temperatura ambiente, en papeles de filtro, bastan para un estudio completo si el Laboratorio cuenta con equipamiento de última generación.

Conservación de muestras de sangre. n n Soportes adsorbentes. Conservación a temperatura ambiente. Largo tiempo de conservación. Permite generar un banco de muestras.

Hisopados bucales n n n Hisopos comunes (no es imprescindible esterilidad). A temperatura ambiente. Largo tiempo de conservación.

Otras evidencias

Otras evidencias

CASO: VIOLACION Muestra indubitada de sospechoso/ s. n Evidencias: hisopados, prendas, pelos, uñas, etc. n Muestra indubitada de la víctima. n

Prendas SI NO

Hisopados vaginales / anales

IMPORTANTE: El análisis previo de las evidencias debe considerar la disponibilidad de muestras para análisis de ADN.

CASO: HOMICIDIO n n n n Manchas biológicas. Material cadavérico Material subungueal Pelos. Colillas de cigarrillos / chicles. Muestras indubitadas de sospechosos. Muestras indubitadas de familiares de la víctima.

MATERIAL CADAVERICO Los restos humanos como evidencia para el análisis de ADN

Requisitos Para la Conservación de Evidencias. n n Material cadavérico fresco: congelado -20 C. Material cadavérico descompuesto: en mezcla de sales (hasta 2 meses), congelado si el periodo es mayor. Material Cadavérico esqueletizado: conservar a temperatura ambiente, en sobres limpios, luego de lavados. Se debe evitar en todos los casos el empleo de fijadores con formol.

Cadáveres reducidos Tiempo de muerte aproximado: 1, 5 años

Cadáveres Saponificados Tiempo de muerte aprox 8 años Tiempo de muerte aprox 1, 5 años

Cadáveres Quemados

Cadáveres en los Primeros Estadíos de Descomposición

Cadáver conservado n Conservado desde su muerte en cámara fría (8 meses).

Cadáver Momificado n n n Tiempo de muerte aprox. 16 años. Inhumado en nicho. Proceso de momificación espontáneo.

Tejidos Conservados n n Ciertos tejidos se conservan debido a condiciones ambientales durante periodos prolongados. Material muscular con más de 10 meses entre escombros de una explosión.

Huesos quemados con más de 10 Años Recibidos En proceso

Identificación Molecular de Restos Fragmentados

1992 Atentado a la Embajada de Israel

Toma de muestras del atentado

1994 Atentado a la mutual israelita AMIA

Atentado a la AMIA Vista general

Atentado a la AMIA. Muestras

PRECAUCIONES DURANTE LA RECOLECCION Y ENVIO DE MUESTRAS 1. Protección del personal Ø Las muestras biológicas potencialmente pueden contener agentes patógenos (VIH, hepatitis, meningitis…) Ø Evitar contacto con la muestra mediante uso de guantes, mascarilla y bata Ø Emplear material desechable Ø Prohibir comer, beber o fumar durante el proceso de recolección Ø Recomendar la vacunación al personal que trabaje con este tipo de muestras

2. Protección de la muestra Ø 2. 1 Contaminación por material biológico humano § Contaminación anterior o previa Se debe a la aparición de la material biológico en el lugar donde luego aparecerán los indicios. INEVITABLE § Contaminación coetánea o paralela El material genético de un indicio se mezcla con ADN de otro origen en el momento de los hechos INEVITABLE, VALORABLE y UTIL § Contaminación posterior Debido al depósito de material genético de diversos orígenes en el indicio con posterioridad al momento de los hechos EVITABLE

2. Protección de la muestra Ø 2. 2 Transferencia de indicios biológicos Traslado accidental de los indicios de un lugar a otro, ocasionando contaminación o pérdida de la muestra (pej. pelos)

2. Protección de la muestra Ø 2. 3 Contaminación biológica no humana Producida por microorganismos que acaban degradando el ADN por acción, fundamentalmente de exonucleasas. (humedad y altas temperaturas) • Puede ocurrir “a priori” a la recolección de indicios (muestras expuestas a condiciones que favorecen la proliferación bacteriana) • Tras la recolección del indicio si el empaquetado y conservación no es el adecuado DEGRADACION DEL ADN

2. Protección de la muestra Ø 2. 4 Contaminación química Producida cuando las muestras se preservan (formol) o se tratan con determinados productos químicos (p ej: algunos reactivos para el estudio de huellas dactilares)

¿ QUE PRECAUCIONES ADOPTAR? Ø Aislar y proteger, lo más rápidamente posible la escena delito Ø Recoger, si es posible, en primer lugar los indicios biológicos Ø Usar guantes limpios que deben cambiarse con frecuencia Ø No hablar o estornudar sobre las muestras. Usar mascarilla Ø Usar bata u otro tipo de ropa protectora Ø Utilizar material desechable Ø No añadir conservantes a las muestras Ø Dejar secar a TA previamente a ser empaquetadas Ø Empaquetar por separado las muestras Ø Empaquetar en bolsas de papel o cartón, NO USAR bolsas de plástico Ø Eliminar todo el material desechable empleado en la recolección de muestras

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS) 1. Personas vivas • Siempre consentimiento informado • Debe existir un documento firmado con la autorización expresa para realizar el análisis En PERSONAS TRANSFUNDIDAS evitar la toma de sangre, podría detectarse el ADN procedente de la sangre transfundida al menos en un corto periodo de tiempo después a la transfusión y si la misma es masiva. SANGRE • Punción dactilar (gotas depositadas en papel secante y se dejan secar a TA) HISOPADOS BUCALES • 2 Hisopos de ambas mejillas (colocar en sobres de PAPEL para evitar la proliferación bacteriana) PELOS CON BULBO • 10 -15 pelos con bulbo

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS) 2. Cadáveres en buen estado de conservación SANGRE post-mortem 1 ml (anticoagulante tipo EDTA) MUSCULO ESQUELETICO Aprox 1 gr. Se almacena en un recipiente plástico y tapón de rosca. PIEZAS DENTALES 2 (molares). Dejar en reserva para evitar la exhumación.

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS) 3. Cadáveres en avanzado estado de putrefacción o esqueletizados HUESO LARGO Fémur, húmero PIEZAS DENTALES 2 (molares). No dañados externamente ni sometidos a endodoncias.

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS) 4. Cadáveres carbonizados • Cuando la carbonización no es total es posible analizar MÚSCULO ESQUELÉTICO de zonas profundas. • Cuando la carbonización es total recomendable contactar con el laboratorio

TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS) 5. Otras muestras de referencia de personas fallecidas • En hospitales: muestras de sangre, biopsias en parafina, preparaciones histológicas No utilizar tejidos fijados en formol ! • Ámbito familiar: peines, maquinillas de afeitar, saliva en estampillas o sobres

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 1. Manchas secas • En soportes pequeños y de fácil transporte Colillas, armas blancas, monedas, llaves, piedras, ramas, papeles Recolectadas por separado e introducidas en bolsas de papel o cajas

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 1. Manchas secas • En soportes grandes no transportables A) Soporte no absorbente (cristal, metal…) Recolectadas con un hisopo mojado en agua destilada (dejar secar antes de guardar) o raspar con bisturí y guardar en bolsa de papel B) Soporte absorbente (telas, tapicerias…) Recortar la mancha y guardar en bolsa de papel

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 2. Indicios húmedos 1. Ropas, tapicerías, toallas… 2. Introducir por separado en bolsas de papel madera 5. Envolver en papel (por separado) y guardar en bolsas de papel 3. Traslado rápido a instalaciones adecuadas 4. Dejar secar en lugar protegido y sobre una superficie limpia

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 3. Indicios líquidos • Sangre - En gran cantidad: recoger con pipeta de plástico y depositarla en un tubo con EDTA - En pequeña cantidad: recoger con hisopo y dejar secar - Coagulada: recoger con una cucharita e introducir en tubo o frasco de plástico

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 3. Indicios líquidos • Semen • Liq amniótico • Orina - Preservativos: tomar hisopados EXTERNOS E INTERNOS y dejar secar - En escasa cantidad: recoger con hisopo y dejar secar - 10 ml que se introducen en un tubo - Recoger con pipeta de plástico desechable y depositarla en un tubo o frasco. Enviar al laboratorio inmediatamente

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los hechos 4. Pelos Cada pelo recolectado con pinzas (desechables o bien limpias) y guardados adheridos sobre una hoja de papel 5. Restos cadavéricos Buen estado de conservación: Tejido muscular sin líquido fijador, en frasco de boca ancha y tapón de rosca, sumergido en sal. Carbonizados: Músculo esquelético de zonas menos afectadas, sin líquido fijador y en frasco de boca ancha y tapón de rosca Avanzado estado de putrefacción / esqueletizados: Hueso largo y dientes (2 molares)

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el cuerpo de la víctima 1. Manchas de sangre, semen u otros fluidos biológicos Recoger con un hisopo húmedo (agua destilada) la mancha en cuestión, dejar secar a TA y guardar el hisopo en sobre de papel 2. Saliva en marcas de mordedura Recoger con un hisopo húmedo (agua destilada) la mancha en cuestión, dejar secar a TA y guardar el hisopo en sobre de papel

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el cuerpo de la víctima 3. Uñas Recoger con una pinza posibles pelos o fibras. Posteriormente cortar el borde superior de las uñas para búsqueda de sangre o piel. Recoger en bolsas de papel por separado. 4. Pelos dubitados Recoger cada pelo con unas pinzas y colocar en un papel que será doblado e introducido en una bolsa de papel.

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en casos de agresión sexual 1. Dos tomas bucales, mediante hisopos pasando por debajo de la lengua, encías y dientes 2. Búsqueda de manchas de semen, saliva o mordeduras 3. Dos tomas cervicales, dos tomas vaginales y una de genitales externos, con hisopos estériles limpiando cuello uterino, cavidad vaginal y la región vulvar 4. Dos tomas anales, con hisopos estériles limpiando el conducto ano-rectal y el margen anal 5. Ropas que portaba la víctima, colocadas en bolsas de papel por separado

TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en casos de investigación biológica de la paternidad 1. Si presunto padre, madre e hijo están vivos Descrito anteriormente 2. Si el presunto padre está fallecido a) Restos óseos o piezas dentales procedentes de la exhumación del cadáver b) Análisis de muestras biológicas del fallecido existentes en hospitales o en el ámbito familiar c) Análisis de muestras biológicas procedentes de familiares del fallecido 3. A partir de restos fetales Recogerlos con unas pinzas en un frasco de boca ancha y con tapón de rosca (sin líquido fijador). Congelar inmediatamente o enviar al laboratorio.

SISTEMAS DE EMPAQUETAMIENTO Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS Tejidos blandos y órganos Indicios líquidos Muestras húmedas (no secas) 1 MANTENER Y ENVIAR REFRIGERADAS y POR UN MEDIO DE Indicios secos no enviar refrigerado TRANSPORTE RAPIDO Tipo de muestra Pertenencia y/o procedencia Nº de referencia de la muestra IDENTIFICACION DE LA MUESTRA Identificación y firma de la persona que recoge la muestra Fecha y hora de recolección CUSTODIA DE LA MUESTRA 2 3

EMPAQUETADO 2. Evitar emplear frascos de cristal 1. Evitar el uso de bolsas de plástico 3. Emplear cajas de cartón o sobre de papel 4. Cada muestra en un recipiente y precintado 4

RECEPCION DE MUESTRAS EN EL LABORATORIO 1º Rellenar la hoja de custodia Nombre de la persona que entrega las muestras Nombre de la persona que recibe las muestras Fecha y hora de entrega Empresa que realiza el transporte 2º Chequear número de referencia de cada muestra y contrastar con el formulario enviado 3º Comprobar la integridad de los precintos 4º Al abrir los recipientes comprobar que identificación y descripción son correctas 5º Fotografiar las muestras Anotar posibles discrepancias Establecer acciones correctoras

GRACIAS! • Laboratorio: www. adn. ac • Sociedad Latinoamericana de Genética Forense: www. slagf. org • Fundacion INGEN – Investigaciones genéticas: www. ingen. org. ar