Mammalian cell culture Introduction Cell line AML12 Chemical

Mammalian cell culture Ⅰ

Introduction Cell line : AML-12 Chemical reagent : WY 14643

10/26 seeding 증식 시킨 cell을 모아 hemocytometer로 counting하여 60π dish 에 원하는 cell양을 seeding *모든 dish에 같은 양의 cell이 들어가는 것이 중요! AML-12 8*10^5 cells/3 ml 10/27 Drug Treat 하나의 dish에는 Control, 나머지 하나에는 Drug을 처리. 필요한 DMSO 농도와 drug 농도 계산을 먼저 하고 처리. Stock: 10 m. M control WY 10μM Control WY 14643 0. 1%FBS Media 2997μl WY 0μl 3μl DMSO(Vehicle) 3μl 0μl

24 h later RNA 추출 c. DNA 합성 추출한 RNA를 c. DNA로 합성 RNA extract 11/3 11/10 Real-Time PCR Control과 Drug에서의 RNA 발현 정도 비교

Materials & Methods Cell seeding 배양할 세포, 배지, PBS, FBS, Antibiotics, Trypsin-EDTA, Water bath, Pipette, Tip, 15 ml tube, Hemocytometer, Tryphan blue, Incubator, Centrifuge 1. 기존의 배지를 제거하고 PBS 1 ml을 조심스럽게 넣고 가볍게 흔들어준다. 2. PBS를 제거한 후 Trypsin 0. 5 ml을 넣고 Incubator에서 2분간 배양한다. 3. 배지 2. 5 ml을 더한 후 Pipetting하여 15 ml tube로 옮긴다. 4. Room Temperature, 1000 rpm에서 5분간 centrifugation한다. 5. 조심스럽게 꺼내어 상층액을 제거하고 새로운 배지 1 ml을 넣어 재혼탁한다. 6. 세포 10 ul + Tryphan blue 10 ul 를 섞어서 10 ul만 Hemocytometer에 분주한다. 7. Cell counting하여 원하는 세포 수 만큼 dish에 분주한다. 8. 잘 흔들어 준 후 현미경으로 관찰하고 Incubator에서 배양한다.

Materials & Methods Treat 배양할 세포, 배지, PBS, FBS, Antibiotics, Trypsin-EDTA, Water bath, Pipette, Tip, 15 ml tube, Incubator, Centrifuge, suction 1. 배지와 Drug를 농도에 맞게 혼합해준다. 2. Incubator에서 Plate를 꺼내 Cell을 현미경으로 관찰한다. 3. 기존의 배지를 suction으로 제거한다. 4. 1. 번의 혼합액을 농도에 맞게 2 ml씩 넣어준다. 5. 현미경으로 관찰 후 Incubator에 넣어 24 h 배양한다.

Discussion Q. 실험에 사용한 세포주와 약물에 대해 조사하시오 Cell line : AML-12 Chemical reagent : WY 14643 Treatment