Mammalian cell culture Cell counting 02 Introduction Hemocytometer

Mammalian cell culture Ⅱ

Cell counting 02 Introduction Hemocytometer Trypan blue staining x dilution factor(ml) Total cells(cells)

Cell counting 02 Introduction Cell Counter

Cell counting 03 Materials & Methods Clean bench, 배양할 세포, 배지, 6 cm dish, PBS, Trypsin-EDTA, Water bath, Pipette, Tip, 15 ml tube, Incubator, Centrifuge, Trypan blue, Hemocytometer 1. 기존의 배지를 제거하고 PBS 4 ml을 조심스럽게 넣고 가볍게 흔들어준다 2. PBS를 제거한 후 Trypsin-EDTA 0. 5 ml을 넣고 2분간 incubation 3. 배지 4 ml을 더한 후 cell을 모아15 ml tube로 옮긴다 4. Room Temperature, 1000 rpm에서 2분간 centrifuge 5. Cell pellet을 제외한 상층액을 제거하고 새로운 배지 5 ml을 넣어 재혼탁한다 6. e-tube에 세포 10 ul + Trypan blue 10 ul 를 섞어서 10 ul를 Hemocytomete에 분주한다 7. 현미경을 통해 Trypan blue로 염색되지 않은 cell(흰색)만 countin한다. 8. Total cells을 구하고 원하는 세포 수를 계산 할 수 있다

Cell counting 03 Materials & Methods Clean bench, 배양할 세포, 배지, 6 cm dish, PBS, Trypsin-EDTA, Water bath, Pipette, Tip, 15 ml tube, Incubator, Centrifuge, Trypan blue, Cell counter 1. 기존의 배지를 제거하고 PBS 4 ml을 조심스럽게 넣고 가볍게 흔들어준다 2. PBS를 제거한 후 Trypsin-EDTA 0. 5 ml을 넣고 2분간 incubation 3. 배지 4 ml을 더한 후 cell을 모아15 ml tube로 옮긴다 4. Room Temperature, 1000 rpm에서 2분간 centrifuge 5. Cell pellet을 제외한 상층액을 제거하고 새로운 배지 5 ml을 넣어 재혼탁한다 6. e-tube에 세포 20 ul + Trypan blue 20 ul 를 섞어서 20 ul를 slide 에 분주한다 7. Cell counter에 slide를 넣고 측정한다 8. Total cells을 구하고 원하는 세포 수를 계산 할 수 있다

Cell counting 04 Result Counting(A+B+C+D)한 세포 수 와 Total cell의 수

Cell counting 05 Discussion Q 1. Trypan blue staining 원리 Q 2. (A+B+C+D)가 400일 때 3*105 cells를 얻기 위해 몇 ml 이 필요한지 구하시오 (trypan blue staining O) Q 3. Hemocytometer 계산법 중 104 를 곱해주는 이유는? 2주차+3주차 report -> 3월 23일 수업시간 제출

310호 507호 3: 20 – 3: 50 8조 3조 3: 50 – 4: 20 6조 2조 4: 20 – 4: 50 4조 1조