Malattie Infettive Virali Malattie Infettive Batteriche AA 2006

Malattie Infettive Virali Malattie Infettive Batteriche AA 2006 - 2007 1

Finalità del corso Conoscenza delle principali Malattie Infettive Conoscenza delle principali Norme di Igiene Conoscenza dei piani di Profilassi immunizzante Conoscenza dei Piani di Eradicazione Conoscenza delle Antropozoonosi 2

PRINCIPALI MALATTIE INFETTIVE • • • In specie da reddito In differenti tipologie di Allevamento BOVINO SUINO OVINO CAPRINO EQUINO Coniglio e Piccole specie 3

PRINCIPALI MALATTIE INFETTIVE Specie d’affezione • CANE • GATTO • Piccole specie 4

Particolare interesse : • per le Malattie Infettive soggette a denuncia ed a piani Nazionali di Eradicazione e Controllo: • Afta Epizootica Brucellosi • Peste Suina Classica Tubercolosi • Peste Suina Africana Leptospirosi • Rabbia Salmonellosi • Retroviridae Carbonchio E. 5

Malattie Enzootiche di particolare interesse Zootecnico • • Leucosi Bovina Visna-Maedi Artrite Encefalite Caprina Blue Tongue Sindrome Aborto- Ipofertilità Bovina Sindrome Aborto- Ipofertilità Ovi-Caprina Sindrome SMAEDI del suino 6

ALTRE PATOLOGIE • Tecnopatie • • • In Allevamento Intensivo Malattie condizionate da: Scarsa igiene Errata Tecnologia di Allevamento Alimentazione inadeguata o carente 7

Criterio didattico e Prova di Esame • L’argomento viene trattato in modo da : - favorire lo studio sui Testi consigliati - permettere l’integrazione Testo/Appunti - favorire la preparazione dell’esame a fine corso Gli schemi di lezione vengono messi a disposizione ad argomento trattato 8

SCHEMA DI STUDIO DI MALATTIE INFETTIVE • • EZIOLOGIA EPIDEMIOLOGIA PATOGENESI DIAGNOSI : Clinica – Anatomo Patologica e sperimentale • TERAPIA • PROFILASSI 9

LA RABBIA Malattia infettiva a carattere acuto, che si manifesta con sintomi esclusivi a carico del SNC con fenomeni eccitativo/depressivo ed associati ad aggressività e paralisi Malattia a carattere antropozoonotico 10

Il virus della Rabbia presenta ampia diffusione territoriale, attitudine a provocare encefalite ad esito letale nei mammiferi ed un elevato rischio sanitario correlato 11

Eziologia Fam. Rhabdoviridae Gen. Lyssavirus (Genotipo 1 -1) Virus Fisso -Isolato e adattato ad animali da laboratorio inoculati per via intracerebrale -Spiccato neurotropismo -Causano Encefalite letale dopo periodo di incubazione costante -Scarsamente rilevabile alle Ghiandole salivari Virus da strada -Isolato da animali naturalmente infetti -Causano encefalite letale con periodo di incubazione variabile -Spiccato tropismo per ghiandole salivari 12

Classificazione • • Famiglia RHABDOVIRIDAE Virus a: RNA monocatenario, lineare, non segmentato a valenza negativa Nucleocapside a simmetria elicoidale Provvisti di Envelope con “aculei” (10 nm): * etere-cloroformio sensibile Forma tipica “a proiettile” (in Greco: rabdo=bastoncino) Dimensioni : 70 x 170 RNA polimerasi-RNA dipendente associata al virus Replicazione intra-citoplasmatica Maturazione per gemmazione dalla membrana plasmatica (envelope) • Genere Lyssavirus= virus della Rabbia • Genere Vesciculovirus= V. Stomatite Vescicolare V. Setticemia Emorragica trota • Genere Ephemerovirus = Virus degli insetti 13

Classificazione Genere LYSSAVIRUS Virus Rabbia (Genotipo 1 -1) Ospiti naturali: cane, gatto, carnivori selvatici, bovino, chirotteri, uomo Distribuzione geografica: mondiale, ad eccezione di Australia, Nuova Zelanda, Giappone, Regno Unito, Islanda, Irlanda, Scandinavia, Antartide 14

Genere LYSSAVIRUS Virus Lagos Bat (Genotipo 2 -2) Ospiti naturali: chirotteri frugivori Distribuzione geografica: Africa sub -Sahariana Virus Duvenhage (Genotipo 4 -4) Ospiti naturali: chirotteri insettivori, uomo Distribuzione geografica: Africa del sud, Zimbawe Virus Mokola (Genotipo 3 -3) Ospiti naturali: Toporagno, uomo, gatto, cane Distribuzione geografica: Africa sub-Sahariana Virus EBL 1 (Genotipo ? -5) Ospiti naturali: chirotteri insettivori Distribuzione geografica: Europa Virus EBL 2 (Genotipo ? -6) Virus ABL (Genotipo ? -7) Ospiti naturali: chirotteri insettivori Ospiti naturali: chirotteri frugivori e insettivori Distribuzione geografica: Europa Distribuzione geografica: Australia 15

2. Spettro d’ospite del virus La malattia è trasmissibile a tutti i mammiferi terrestri che ne costituiscono anche i potenziali ospiti naturali/diffusori di contagio Principali specie “serbatoio” del virus in natura. Ciclo silvestre in differenti aree geografiche Volpe rossa Procione Mangosta Vampiro Moffetta Chirotteri 16

3. Struttura antigene Gli anticorpi verso la proteina G neutralizzano la capacità infettante del virus Gli anticorpi rivolti verso le proteine del nucleocapside non sono neutralizzanti Esistono diversi stipiti del virus Identificabili tramite l’utilizzo di anticorpi monoclonali 17

4. Replicazione del virus nella cellula ospite 18

Epidemiologia Distribuzione geografica – Mondiale Ospiti naturali – – – Cane Gatto Carnivori selvatici Chirotteri Bovino e altri Ruminanti domestici e/o selvatici – Uomo Aree indenni – – – – Australia Nuova Zelanda Giappone Regno Unito Antartide Alcune regioni scandinave Hawaii ed alcune isole del pacifico 19

Cicli epidemiologici della rabbia CICLO SILVESTRE CICLO URBANO vede implicati selvatici di specie variabile nelle diverse aree geografiche • Volpe • Mangosta • Procione • Moffetta • Chirotteri • Ruminanti domestici e selvatici Si esprime fra i domestici e trova nel randagismo il principale meccanismo di attivazione e conservazione UOMO • Cane • Gatto • Selvatici addomesticati o che si avvicinano ai centri urbani 20

Caratteristiche degli animali che presentano attitudine a trasmettere la rabbia • Biologiche – Efficienza dell’escrezione salivare • Fisiche – Taglia medio piccola – Induttori di ferite non mortali – Assenza di vello denso e folto • Comportamentali – Attitudine a combattimento-aggressività 21

Modalità di trasmissione Ai fini della diffusione della rabbia è essenziale l’escrezione salivare del virus e il contatto della saliva infetta con un ospite recettivo L’escrezione salivare del virus può verificarsi per tempi variabili prima dell’insorgenza di sintomi neurologici e prima della fase paralitica della malattia 22

• Trasmissione all’uomo e agli animali attraverso la morsicatura Altre vie di trasmissione includono: • la contaminazione attraverso le mucose • lambitura (madre - cucciolo; cucciolo-cucciolo) Volpe • Aerosol (escrezione virus per via respiratoria/enterica) Chirotteri insettivori • secrezione lacrimale (si riporta un caso umano conseguente a trapianto corneale) 23

Frequenza di escrezione salivare del virus in soggetti rabidi Ospite Isolamento dalle ghiandole salivari(%) Bovino 47 Cane 74 Gatto 88 Volpe 20 -73 Procione 63 Moffetta 83 24

Patogenesi 2. Replicazione del virus nel punto di inoculo Cui segue eclisse=passaggio dalle cellule del 1. Animale Morsicato da animale 2. infetto tessuto muscolarea quelle del SNP: Migrazione Centripeta 3. attraverso nervi periferici e midollo spinale il virus raggiunge 5. Espressione dei segni il SNC e replica nei neuroni clinici e diffusione del virus Cui segue Migrazione tramite: animale morsicatore Centrifuga. . cui segue: 6. Morte dell’animale 4. . . e diffusione del virus alle ghiandole salivari e conseguente escrezione virale con la saliva 25

La morsicatura è il principale mezzo di trasmissione del virus Spiccato tropismo del virus per il sistema nervoso e le ghiandole salivari Manifestazioni cliniche ed eliminazione del virus con la saliva 26

• In seguito all’infezione il virus entra in una fase di eclissi in cui non è evidenziabile – Questa fase può durare parecchi giorni o mesi • Si osserva replicazione virale nelle cellule muscolari cui segue l’invasione delle terminazioni nervose • La penetrazione nei nervi periferici è essenziale per la progressione dell’infezione • Attraverso i nervi periferici il virus è trasportato al SNC attraverso il flusso assoplasmatico retrogrado 27

• Il periodo d’incubazione varia da pochi giorni a diversi anni, ma generalmente è di 1 -3 mesi • La diffusione del virus all’interno del SNC è rapido e include primariamente i neuroni del sistema limbico • L’infezione al SNC è seguita da una diffusione centrifuga passiva ai nervi periferici • La diffusione centrifuga determina l’invasione di siti tissutali altamente innervati, tra cui le ghiandole salivari • Durante il periodo di infezione cerebrale si osservano i classici segni comportamentali associati al progredire della rabbia 28

Sintomatologia • Periodo d’incubazione: variabile – Legato alla specie interessata e ai caratteri dello stipite virale • Fase prodromica: sintomatologia generica – stato ansioso, irritabilità - depressione – segni di neurite nell’area di morsicatura nell’uomo • Fase clinica: segni neurologici- “Rabbia Furiosa” – – allucinazioni, disorientamento e vagabondaggio iperattività a carattere furioso, pica Idrofobia per spasmo del faringe Paralisi dei masseteri e del faringe • alterazioni della fonesi e perdita di saliva • Fase terminale: paralisi, coma e morte 29

Rabbia Paralitica Il 25% dei casi di rabbia può evolvere “senza aggressività” E’ caratteristica nei Paesi del Continente americano in bovini. Il virus della Rabbia è trasmesso da “vampiri” (chirotteri ematofagi) Al contagio fa seguito una fase prodromica simile alla Rabbia furiosa: sintomi generali quali: stato ansioso, irritabilità - depressione cui segue: Paralisi flaccida progressiva e morte Questa forma può interessare anche l’uomo e con l’espianto degli organi è stata trasmessa la malattia: in 4 casi accertati di trapianto della cornea. Rabbia Cronica Caratterizzata da prolungata escrezione salivare associata ad assenza di sintomi neurologici per lunghi periodi; alla loro comparsa fa seguito la morte. Particolarmente importante da un punto di vista epidemiologico nel Ciclo Silvestre-Animali serbatoio di infezione. 30

Forme cliniche di Rabbia • Rabbia furiosa • Carnivori domestici “ciclo urbano” • Carnivori selvatici “ciclo silvestre” UOMO • Rabbia non furiosa: • Paralitica-cronica Es: Vampiro-Bovino Chirotteri non ematofagi UOMO Sporadica in altre specie Recettive-Serbatoio 31

Lesioni Anatomo-istopatologiche • Assenza di lesioni macroscopicamente apprezzabili • Istologicamente si riscontra encefalomielite caratterizzata da – Infiltrazione mononucleare – Manicotti perivascolari di linfociti o leucociti PMN – Foci linfocitari e plasmacellule 32

–Noduli di Babes rappresentati da aggregati di cellule gliali a livello di SNC 33

– Corpi del Negri (inclusioni citoplasmatiche eosinofile) • In particolare nelle cellule piramidali dell’ippocampo e nelle cellule del Purkinje nel cervelletto – Queste sono rappresentate da aree di attiva replicazione virale e contengono ribonucleoproteine virali e altri costituenti virali e cellulari Corpo del Negri in un neurone infetto Corpo del Negri a maggior ingrandimento in un neurone infetto. Si noti la presenza di granuli basofili blue scuro all’interno 34 dell’inclusione

Nota storica • Nel 1903, il Dr. Adelchi Negri descrisse ciò che credeva essere l’agente eziologico della rabbia: i Corpi del Negri – Li descrisse come inclusioni rotonde od ovali, delle dimensioni di 0. 25 -27 µm all’interno del citoplasma delle cellule nervose di animali affetti da rabbia – Frequentemente erano evidenziabili nelle cellule piramidali del Corno di Ammone e nelle cellule del Purkinje del cervelletto. Inoltre erano evidenziabili nelle cellule del midollo spinale, in diversi gangli e nei neuroni delle ghiandole salivari, della lingua e altri organi. • Le colorazioni di Mann's, Giemsa e Sellers gli permisero di differenziare le inclusioni della rabbia da altre inclusioni. Con queste colorazioni infatti i Corpi del Negri apparivano color magenta con all’interno piccoli (0. 2 µm - 0. 5 µm), granuli basofili blue scuro 35

Diagnosi Clinica Rilevamento delle turbe comportamentali e dei segni neurologici Postmortem NO lesioni macroscopiche D. Laboratorio • Esame istologico • Immunofluorescenza • Immunoistochimica • RT/PCR • Prova biologica • Isolamento su colture cellulari • Microscopia elettronica 36

Immunofluarescenza (IF) L’immunofluorescenza è il test standard per la diagnosi di rabbia. Gli anticorpi utilizzati nel test di IF sono diretti contro le nucleoproteine del virus. Il virus della rabbia replica nel citoplasma dei neuroni e le inclusioni presenti, contenenti RNP, appaiono come particelle fluorescenti con questa metodica 37

Immunoistochimica (IHC) IHC rappresenta un metodo sensibile e specifico per diagnosticare la rabbia in tessuti fissati in formalina. Neurone infetto con inclusioni intracitoplasmatiche. La colorazione rossa indica aree in cui son presenti antigeni del virus della rabbia 38

Microscopia elettronica L’ultrastruttura del virus può essere esaminata con la microscopia elettronica. Questo metodo permette di osservare in dettaglio le componenti strutturali del virus e delle inclusioni citoplasmatiche A. Forma a proiettile del virus B. Striature delle RNP simil “nido d’ape” C. Spikes glicoproteici all’esterno del envelope A. Corpo del Negri B. Abbondante RNP nell’inclusione C. Budding del virus. 39

Prova biologica Inoculazione del materiale patologico per via cerebrale nel topo neonato. Nel caso di insorgenza di sintomi neurologici, il SNC del topo viene sottoposto ad esame istologico e ad immunofluorescenza Colture cellulari L’isolamento su colture cellulari aumenta la concentrazione del virus presente in campioni in cui la quota virale è presente in piccola quantità e e difficilmente evidenziabili con le comuni metodiche. Le colture di neuroblastoma di topo (MNA) e di rene di hamster neonato (BHK) rappresentano un eccellente substrato per la crescita del virus della rabbia 40

RT/PCR Con questa metodica l’ RNA virale può essere tradotto e amplificato in copie di DNA. 41

Terapia • Nell’uomo somministrazione di siero immune, gammaglobuline o vaccinazione • La sieroterapia incide sui primissimi stadi dell’infezione • Il trattamento non interferisce sul decorso della malattia quando sia già iniziata la fase neurologica • Nell’animale responsabile di aggressione è vietato qualsiasi trattamento che modifichi o alteri il decorso della malattia 42

Profilassi Sanitaria • Attuazione delle Norme di Polizia Veterinaria • Prevenzione del ciclo urbano (vaccinazione obbligatoria in alcune regioni o volontaria degli animali domestici) • Lotta al randagismo • Quarantena degli animali aggressori sospetti • Soppressione dell’animale aggredito, salvo deroghe 43

Profilassi Vaccinale Pre contagio* – Post contagio** Vaccino vivo attenuato* Utilizzati gli stipiti Flury (derivato dall’uomo e attenuato su uova embrionate) e SAD (derivato dal cane e attenuato su topo, colture cellulari e uova embrionate) Distribuiti liofilizzati Monovalenti Protezione per 2 -3 anni Vaccino inattivato** Derivano dal virus Pasteur Garantiscono innocuità totale Efficacia variabile (dose, fattori individuali, struttura antigene, agente inattivante, adiuvante) Protezione simile ai vaccini vivi-attenuati Mono o Polivalenti 44