m Microscope illumination structure Mise en place dun

μm Microscope à illumination structurée Mise en place d’un montage pédagogique de microscopie par illumination structurée à l’IOGS. Fluorescence Montage Nous avons marqué des échantillons biologiques de cancer des os avec un fluorophore: l’Alexa 488. Excités par une lumière bleue (~490 nm) , ils réémettent dans le vert (~520 nm). Figure 2: Image de la fluorescence des cellules de cancer des os(x 60) Mise en place de l’expérience: Figure 1: Schéma du montage Sectionnement Optique: Nous avons eu la chance de participer au choix des différents composants listés ci-dessous. Nous avons aussi disposer et régler les différents éléments sur le banc optique. -Matrice de micro miroirs ou DLP de 640 x 360 miroirs de 7, 56μm -Microscope OLYMPUS et objectif x 60 -Eclairage Kohler (source LED à 470 nm) -Filtres adaptés à l’éclairage et à la fluorescence de l’Alexa 488 -Caméra Basler 2048 x 1088 pixels ( pixel de 5, 5μm x 5, 5μm) et zoom x 2 Figure 4: Photo de notre expérience de microscopie en cours de réglage Plus les fréquences spatiales d'un échantillon sont élevées, plus la profondeur sur laquelle le système est au point diminue. On peut alors en sur-imposant une mire de période très fine dans le plan de la préparation mettre au point sur un plan très fin. Cette méthode demande alors de décaler la mire pour obtenir les parties de l'image occultées et un traitement des images obtenues. En pratique la mire est réalisée avec une matrice de micro miroirs contrôlables (DLP). Perspectives: (a) (b) Figure 3: (a) Image obtenue sans traitement. (b) image obtenue après traitement de 4 images dont la mire a été décalée d’un quart de période. - La super résolution En superposant une mire ayant de fréquence spatiale proche de la limite de résolution, on peut par un traitement numérique reconstruire une image deux fois mieux résolue à partir de ces battements. Problèmes rencontrés: manque de précision sur l’alignement et de mise au point pour arriver en limite de diffraction. - Automatisation de la mesure nécessitant: La synchronisation du DLP et de la caméra L'alignement de la mire avec l’axe de la caméra (soit par traitement d’image ou par rotation de la mire) -Amélioration de la méthode de reconstruction Il existe des méthodes plus efficaces de reconstruction nécessitant la mesure de FTM du microscope, obtenue en mesurant le contraste d’une image éclairée avec une mire FTM. Projet réalisé dans le cadre des PIMS 2019/2020 Par Elsa COUSTHAM, Stéphane COHEN et Noémie MARQUET Avec l’aide de Nathalie WESTBROOK, Thierry AVIGNON, Julien MOREAU, Guillaume DUPUIS et le laboratoire ISMO www. institutoptique. fr