Les Enterobacteriaceae 1 Les Entriques 2 La famille

Les Enterobacteriaceae 1

Les Entériques 2 • La famille des Enterobacteriaceae est souvent connue comme les “entériques” • Quatre caractéristiques majeures: Ils fermentent tous le glucose (dextrose) Ils réduisent tous les nitrates aux nitrites Ils sont tous oxydase négatifs Plusieurs se retrouvent dans les intestins des humains et d’autres mammifères • Pathogénicité diverse: • • • Commensaux, opportunistes ou pathogènes

Diagnostic en Laboratoire des Entérique 3 • Fermentation des sucres • Bouillon phénol rouge • Trois sucres + fer (TSI) • Méthyl Rouge - Vogues Proskauer • SIM • Dégradation du tryptophane et de la cystéine; motilité • • Utilisation du Citrate Production d’Uréase Désaminase de la Phénylalanine Tests de Décarboxylases

Bouillon de Phénol Rouge 4 • Détermine source de carbone préférée et métabolisme (Oxydation ou fermentation) • Contiens des sources de carbones simples: • Peptone (protéines acides aminés) • Sucre désiré est ajouté • Contiens un indicateur de p. H • Phénol rouge • Jaune - p. H acide - Fermentation • Orange – p. H neutre - Oxydation • Rouge – p. H alcalin - Oxydation

Bouillons Phénols Rouges A. Jaune (acide) + gaz = Fermentation du sucre B. Jaune(acide) pas de gaz = Fermentation du sucre C. Orange (neutre) pas de gaz = Oxydation du sucre D. Rouge (alcalin) pas de gaz = Oxydation des protéines E. Non inoculé 5

TSI — Trois Sucres + Fer • Pente rouge/Bout rouge • Pas de fermentation • Catabolisme des protéines • Pente rouge/Bout jaune • Fermentation du glucose seulement • Pente jaune/Bout jaune • Fermentation du lactose et/ou sucrose 6

Test de Méthyl Rouge 7 • Test pour la fermentation avec accumulation d’acide • Source de carbones: Glucose et protéines • Glucose pyruvate Acide lactique et/ou acétique + CO 2 Neutre • Indicateur –Méthyl rouge • MR +: Rouge (p. H < 5. 2) • MR - : Jaune (p. H > 5. 2) Acide

Test Voges-Proskauer 8 • Utilisé pour déterminer s’il y a fermentation avec production de sous produits neutres • Glucose pyruvate acétoine butanediol Réactifs Acétoine + -naphthol + KOH + O 2 Couleur rouge -+

Test Sim : Sulfide, Indole, Motilité 9 • Sulfide: Identifie les bactéries capables de métaboliser la cystéine • Cysteine H 2 S; H 2 S + Fe. SO 4 Précipité noir • Indole: Identifie les bactéries capables de métaboliser le tryptophane • Conversion du tryptophane en indole et acide pyruvique par l’enzyme la tryptophanase • Réactif de Kovac réagit avec l’indole pour donner une couleur rouge

Non Inoculé Non-motile + H 2 S et motile Indole -

Utilisation du Citrate 11 • Sodium citrate seule source de carbone • Indicateur de p. H - bromothymol bleu Sodium citrate → Acide pyruvique + acide Oxalacetique acid + CO 2 L’excès de sodium du Sodium Citrate + CO 2 + H 2 O → Na 2 CO 3 (p. H : vert → bleu) + -

Test d’Uréase 12 • Utilisé pour différentier les organismes d’après leur capacité de faire l’hydrolyse de l’urée par l’enzyme uréase • L’indicateur de p. H, phénol rouge, est utilisé pour déceler la dégradation de l’urée et la production d’ammoniaque • L’accumulation de produits alcalins, NH 4(CO 3)2, change le phénol rouge au rose + -

Test de Désaminase de la Phénylalanine 13 • Utilisé pour identifier les bactéries qui possèdent l’enzyme de la désaminase de la phénylalanine • La désaminase de la phénylalanine convertit la phénylalanine à l’acide phénylpyruvique + NH 3 • Le chlorure ferrique (Fe. Cl 3) réagit avec l’acide phénylpyruvic et change la couleur du jaune au vert + -

Tests de Décarboxylase 14 • Contient du glucose, acide amine test et un indicateur de p. H • La fermentation du glucose génère des acides (milieu devient jaune) et active la décarboxylase • Si la décarboxylase est présente, elle génère des produits alcalins et change l'indicateur de p. H au violet (positif). • Si aucune décarboxylase n'est présente, le milieu reste acide et jaune (négatif)

Bouillon de Décarboxylase de l’Ornithine 15 • Interprétation • Tubes 1 –aa & +aa: Réaction acide – fermentation du glucose; pas de décarboxylation • Tube 2 -aa: Réaction acide – Fermentation du glucose • Tube 2 +aa: Réaction acide – Fermentation du glucose suivi de la décarboxylation (réaction alcaline) 1 2 - aa +aa -aa +aa

Lysine Décarboxylase 16 • Pente de Lysine avec fer • Contiens de la lysine, du glucose, des peptones, du pourpre de bromocrésol (indicateur de p. H), du thiosulfate de sodium • La décarboxylation de la lysine est un procédé anaérobie qui se produit dans le bout La décarboxylation de la lysine génère un produit aminé qui réagit avec l'indicateur de p. H pour donner une couleur mauve dans le bout • Décarboxylation négative: bout jaune

Lysine Désaminase 17 • Pente de Lysine avec fer • La désamination de la lysine est un procédé aérobie qui se produit sur la pente • La désamination de la lysine génère de l’ammoniaque qui réagit avec l'indicateur de p. H pour produire un couleur rouge foncé sur l'inclinaison • Désamination négative: Pente mauve

Pente de Lysine avec Fer 1. Pente et bout mauve • Décarboxylase positif 2. Pente mauve et bout jaune • Décarboxylase négatif 3. Pente mauve et bout noir • Décarboxylase positif 4. Pente rouge et bout jaune • Désaminase positif 18

Test de Nitrate Réductase 16 • Utilisé pour détecter la capacité d'un organisme de réduire le nitrate (NO 3) en nitrite (NO 2) ou en un autre composé azoté, tel que l'azote moléculaire (N 2) en utilisant l'enzyme nitrate réductase

Nitrate Réductase 17 NO 3 - + 2 H+ + 2 e- H 2 O + NO 2 - NH 3 or N 2 Nitrate Nitrite Étape 1: Test pour nitrite NO 2 - + acide sulfanilique et alpha naphtylamine HNO 2 • Couleur rouge indique la présence du Nitrite • Nitrate a été réduit • Couleur jaune indique l’absence de Nitrite • Nitrate n’a pas été réduit • Nitrate a été réduit au Nitrite qui a été réduit + ?

Nitrate Réductase (Suite) 18 Interprétation de résultats ambigus après l’étape 1 Étape 2: Test pour la présence du nitrate NO 3 - + Zn (s) NO 2 - • Couleur rouge indique la présence du Nitrate + • Nitrate n’a pas été réduit par la bactérie. A été réduit par le Zn • Couleur jaune indique l’absence du nitrate • Nitrate a été réduit au Nitrite qui a été réduit -

22 NO 3 - + 2 H+ + 2 e- H 2 O + NO 2 - Nitrate Nitrite