Lektion 10 Kromosomer og kromosomfejl Fremstilling af kromosomprperater

Lektion 10: Kromosomer og kromosomfejl • • Fremstilling af kromosom-præperater Normale karyotyper fra husdyr Kromosomfejl hos husdyr Identifikation af kromosomer med kromosom paint • Kromosomfejl påvist ved DNA-indhold i sædceller • Nyheder indenfor forskning

Fremstilling af præperater • • Dyrkning af lymfocytter Høst af celler Farvning Dyrkning af andre celler

Fremstilling af præperater • Hypotonbehandling • Fixering af celler • Air drying teknik

Normale karyotyper, svin 2 N = 38, XX

Normale karyotype, kvæg Antal kromosomer: 2 N = 60, XY

Normale karyotyper, kat 2 N = 38 XY

Indikation for kromosom undersøgelse • Fertilitets problemer • Nyfødte med multiple misdannelser

Kromosomfejl, kvæg Trisomi 22, 2 N = 61, XX Translokation 1 -8, 2 N = 60, XY

Mindre grove kromosomfejl Kendte centromer fusioner Kvæg Blåræv Svin 1/29 23/24 14/16 Tæve kromosomtal 48 49 50 Kromosom 1 og 29 17 Fusion 1/29 Antal kuld Kuldstørrelse 16 42 11, 9 9, 8 11, 2 En centromerfusion hos heterozygot nedsætter fertiliteten ca 10 %

Mindre grove kromosomfejl Centromerfusion hos blåræv

Mindre grove kromosomfejl Kønskromosomfejl: XY, XXX og X 0 hopper Blodkimærer hos kvæg tvillinger: Tyrekvier

Imprinting, kromosomfejl Uniparental disomi

Kromosom paint • Identitet af et kromosom eller kromosomstykke påvises vha. kromosom paint • Anvendelse af artsspecifikke prober: c. DNA, cosmider, bac kloner etc. • Anvendelse af kromosomspecifikke biblioteker (paints): Artsegne (Homolog) Fremmed art (Heterolog)

Kromosom paint, metoder • Opmærkning af probe med biotinilerede nucleotider • Smeltning af probe og mål-DNA (kromosomer) • Hybridisering under dækglas i op til flere døgn • Afvaskning af overskydende probe • Et lag af avidin (avidin binder meget stærkt til biotin) • Farvning - fluorescens mærket antistof mod avidin

Kromosom paint: Grise Eksempel Anvendelse af svine kromosom 12 p-arm fra bibliotek på svinekromosomer Bagrundsbillede: To gule pletter er p-armen på svinets kromosom 12 Sort/hvid billede af samme paint med to farvede kromosomstykker

Kromosom paint: Human Eksempel De humane kromosomer painted med hver sin farve Metafase Karyotype Sort/hvid billede og paint med to farvede kromosomer med en translokation

Kromosom paint Eksempel med mink cosmid

Eksempel på heterolog paint Mink 13 Human 14 probe

Kromosom paint Eksempel med grise BAC på Xchromosom

Kromosomfejl påvist ved DNAindhold i sædceller Flow-cytometri på sædceller 4% afvigelse { Y X

Kromosomfejl påvist ved DNAindhold i sædceller

Kromosomspecifikke DNAprober til påvisning af nondisjunktion i sædceller Mink kromosom 8 specifik probe

Kromosomspecifikke DNAprober til påvisning af nondisjunktion i sædceller

Ploidi hos embryoner undersøgelser vha. kromosom specifikke prober Viuff et al. 2000, Biol. Reprod. 63: 1143 -48

Aneuploidi hos fostre Problemer med spindel hos hunlig meiose Nondisjunktion, Fra Science 2002, vol 296, 2164

Maternelle celler hos foster. Kan give anledning til autoimune sygdomme A boy with juvenile dermatomyositis hosts a blue-stained white blood cell (right) with two X chromosomes (pink) and no Y chromosomes (green). Fra Science 2002, vol 296, 2171 Cells Exchanged During Pregnancy Live On

Meiotic recombination, synaptimal complex

Number of recombinations per spermatocyte depending on mouse strain

Non random inactivation or asynchronous replication

Synaptimal complex chiasma protein Am J Hum Gen 71: 1353, 2002