Leccin 2 Observacin de microorganismos 1 Fundamentos del

Lección 2. Observación de microorganismos 1. Fundamentos del microscopio óptico 1. 1 El microscopio de campo claro 1. 2 Tinción de microorganismos para su observación al microscopio de campo claro 1. 3 Microscopio de contraste de fases 1. 4 Microscopio de campo oscuro 1. 5 Microscopio de fluorescencia 2. Microscopio confocal de barrido con láser 3. Fundamentos del microscopio electrónico 3. 1 Microscopio electrónico de transmisión 3. 2 Microscopio electrónico de barrido

Recorrido de la luz Aumento Imagen visualizada ojo Lente ocular Imagen intermedia (invertida respecto a la muestra) Lente objetivo Muestra Ninguno Condensador Fuente de luz Microscopio óptico

Tinción de células para la observación microscópica Extensión de una fina capa de células sobre el porta Adición del colorante lavado y secado Secado al aire Fijación por flameado del porta Se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el porta y se observa con el objetivo de 100 X

Tinción de Gram Tinción del frotis Paso 1 Paso 2 Previamente fijado al calor, con cristal violeta Durante 1 minuto. Todas las células se tiñen de color azul-violeta. Añadir Lugol, dejar actuar 2 minutos Todas las células siguen de color azul-violeta. Gram + Decolorar con alcohol Paso 3 Las células Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran. Tinción de contraste Con safranina 2 minutos. Las células G+ se ven azul-violeta. Paso 4 Las G- rosas o rojas. Gram -

Microscopio de Campo Claro Alga verde (eucariota) Microscopio de Fluorescencia Bacteria filamentosa Teñida con naranja de acridina Microscopio de Contraste de Fases Saccharomyces cerevisiae Microscopía Confocal por Láser Cianobacteria filamentosa

Microscopio láser de barrido confocal

Sonda filogenética Colorante fluorescente Microscopio de fluorescencia Tinción células con sondas filogenéticas unidas a un colorante fluorescente

FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH 3 → NO 2 -) Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO 2 - → NO 3 -)

Oxidación anaerobia de metano en sedimentos marinos Agregados de bacterias metanogénicas (rojo) rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde) Cada tipo celular está teñido con un colorante filogenético (FISH) diferente Bacterias sulfato-reductoras Bacterias metanogénicas

Micrografía Láser Confocal de una muestra de fango de aguas residuales

Microscopio Electrónico Transmisión Barrido