LE BOUILLON NITRAT Recherche de la Nitrate Rductase

LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 1. Intérêt Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE. 2. Composition Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium Na. NO 3 (1% = 1 g / 100 m. L) 3. Principe Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO 3 - sont réduits par la nitrate réductase : - Soit en NITRITES NO 2 - : glucose produits oxydés + n e- NO 3 - + ……… NO 2 - + ……… nitrate réductase (stade nitrites) - Soit en DIAZOTE N 2 : glucose produits oxydés + n e- NO 3 - + ……… N 2 + ……… nitrate réductase (stade diazote)

LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) -LE RÉACTIF DE GRIESS : Ø Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + a-naphtylamine (nitrite 2) Ø Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO 2 - : Réactif de Griess + ions nitrites NO 2 - COMPLEXE ROUGE -LE ZINC (Zn) : Ø Composition : Zinc pur (en poudre) Ø Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO 3 - : Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO 3 - (éventuellement présents) en ions nitrites NO 2 -. Ces ions nitrites NO 2 - peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge 4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)

LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 2 (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) NI T 1 5. Lecture Réactif de Griess (nit 1 + nit 2) Observation : coloration rouge Interprétation : présence de NO 2 - issus de la réduction des NO 3 Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO 2 -) Zinc Observation : pas de coloration rouge Interprétation : pas de présence de NO 2 issus des NO 3 -. Les NO 3 - été réduits en N 2 par la bactérie Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N 2) Observation : coloration rouge Interprétation : le Zn a réduit les NO 3 encore présents en NO 2 - qui sont révélés par le réactif de Griess. => Pas de réduction de NO 3 - en N 2 Conclusion : NITRATE REDUCTASE -