LABORATORIO INMUNOLOGICO EN LA PRACTICA CLINICA DIAGNOSTICO PRESUNTIVO

LABORATORIO INMUNOLOGICO EN LA PRACTICA CLINICA

DIAGNOSTICO PRESUNTIVO LABORATORIO BASICO LABORATORIO INMUNOLOGICO ESPECIFICO

LABORATORIO BASICO VSG (ERS) PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO HEMOGRAMA

ABORATORIO INMUNOLOGIC ESPECIFICO INMUNODEFICIENCIAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS ENFERMEDADES ALERGICAS ENFERMEDADES AUTOINMUNES ENFERMEDADES ONCOLOGICAS

INTERACCION AG- AC EIA (ELISA) PRIMARIAS RADIOCOMPETITIVOS (RIA) INMUNOMARCACION (CITOMETRIA DE FLUJO) IDR SECUNDARIAS AGLUTINACION/ PRECIPITACION INMUNOELECTROFORESIS

Propiedades de las Técnicas Inmunológicas Sensibilidad (prueba positiva en pacientes que tienen la enfermedad)VP Especificidad (prueba negativa si la enfermedad no esta presente) VN Técnicas cuantitativas TITULO Técnicas cualitativas SI/NO Técnicas semi-cuantitativas

INTERACCION SECUNDARIA

INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) Reacción de precipitación en medio gelosado TÉCNICA CUANTITATIVA ¿QUE PUEDO DETERMINAR? Concentración sérica de Ig. G, Ig. A o Ig. M Concentración sérica de los componentes del sistema del complemento: C 1 -C 9, factor H, factor I, factor B y C 1 inhibidor.

Formación de la red Ag-Ac EFECTO PROZONA Ag particulados: aglutinación Ag solubles: precipitación Ag y Ac deber ser al menos bivalentes y deben estar en concentraciones del orden de mg/ml a fin de visualizar el fenómeno. Suelen ser técnicas de baja sensibilidad.

Aglutinación activa o directa Ag particulado Ac específico ¿PARA QUÉ ? Detección/titulación de Ac específicos o antígenos Cuantificación de Ag (IHA) TÉCNICA CUALl. TATIVA O SEMI-CUANTITATIVA (cuando se determinan Ac) TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA (cuando se determinan Ag por IHA o aglutinación reversa)

Determinación de grupos sanguíneos sistema ABO TÉCNICA CUALITATIVA +

BANCOS DE SANGRE (RESOLUCIÓN MINISTERIAL 865/06) EL USO DE DOS TÉCNICAS DE ELISA (DE ANTÍGENO DE LISADO U HOMOGENATO TOTAL Y DE ANTÍGENOS RECOMBINANTES) ES RECOMENDABLE. HEMAGLUTINACIÓN INDIRECTA (HAI): CHAGAS (IGG) El suero del paciente contiene Ac anti-T. cruzi que inducen la aglutinación de glóbulos rojos recubiertos o sensibilizados con antígenos del parásito INTERPRETACION DE RESULTADOS DILUCIÓN DEL SUERO 2 4 8 16 32 64 128 256 512 Paciente 1 Paciente 2 Paciente 3 Titulación de Ac anti T cruzi

INMUNODEFICIENCIAS Ig. G, Ig. A, Ig. M. Ig. E. (ELISA, IDR, PRIST, RAST) Anticuerpos específicos (difteria, tétanos). (ELISA) Recuento de linfocitos T: CD 3, CD 4, CD 8. (CITOMETRIA DE FLUJO) Complemento. (IDR, NEFELOMETRIA, ELISA) Test de nitroblue de tetrazolio. Serología para VIH. (ELISA, WESTER BLOT)

GAME ANTICUERPOS ESPECIFICOS Concentración de inmunoglobulinas en suero adulto normal (mg/100 ml) Ig Concentra Nivel ción inferior superior Ig. G 1. 250 950 1. 550 Ig. M 90 70 110 Ig. A 210 160 260 Ig. E 0. 0004 0. 0002 0. 0006 Ig. D 0. 2 0. 1 0. 3 DIFTERIA, TETANOS ISOHEMAGLUTININAS INTRADERMOREACCION

SIFILIS ( SCREENING, DIAGNOSTICO Y SEGUIMIENTO) FTABS-TPHA -EIA (AGLUTINACION, IF, ELISA ) Detecta anticuerpos específicos dirigidos contra T. pallidum. Se informa reactivo o no reactivo. Perduran toda la vida aún cuando el paciente haya resuelto la infección VDRL (AGLUTINACION) Utiliza como antígeno cardiolipina. Se informa la dilución máxima positiva de la aglutinación. Screening y respuesta al tratamiento según el titulo Ambos tipos de anticuerpos son evidenciados a través de ensayos de aglutinación. Titulacion.

Ig M Ig G ESPECIFICA SEROCONVERSION Producción de anticuerpos específicos frente a un microorganismo, detectables en el suero, durante el curso de una infección o en respuesta a una inmunización.

INTERACCION PRIMARIA

ELISA (interacción primaria) Determinación de Ag TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA Detección o titulación de Ac TÉCNICA CUALl. TATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

Cuantificación de Ig. E total (ELISA) Titulación de Ig. E específica de Ag Las concentraciones de Ac Ig. E, totales y específica para un alergeno, pueden también determinarse por ELISA (semi-cuantitativas).

INMUNOMARCACIÓN (interacción primaria) ¿PARA QUÉ ? Detección de Ac Titulación de Ac Detección de Ag de superficie o intracelulares Detección de poblaciones celulares TÉCNICA CUALl. TATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

Inmunomarcación en portaobjetos Depósito de complejos inmunes Determinación cualitativa de los complejos inmunes depositados en piel, riñón u otros tejidos. Muestra: BIOPSIA. Determinación de presencia de Ig. G. Determinación de presencia de C 3 a y/o C 5 a. Método: inmunofluorescencia indirecta. Inmunomarcación en cortes de riñón Detección de Ig. G con anti-Ig. G humana Paciente con Síndrome de Goodpasture

Citometría de flujo ¿Qué tipo de información obtenemos? § Su tamaño § Su granularidad § La presencia de moléculas de superficie celular e intracelulares (mediante el uso de fluorocromos)

Fenotipificacio n Viabilidad celular Ciclo celular Apoptosis Capacidad fagocitica

ANALISIS DE LOS DATOS Histograma monoparametrico Histograma biparametrico (dot plots) Selección de una población mediante la determinación de una región o “gate” para posterior análisis (por ejemplo, células linfoides).

Evaluación de estallido respiratorio Reducción NBT (incoloro) + PMN (activados con PMA) TÉCNICA CUALITATIVA formazán (NBT reducido) AZUL microscopio 95% azules: SANO 20 -80% azules: Enf. Granul. Crónica Individuo normal Paciente con EGC

TRANSPLANTE CULTIVO MIXTO LINFOCITARIO CROSS MATCH CONTRA PANEL Detecta la presencia de ANTICUERPOS en contra de otros HLA que están directamente relacionadas con el rechazo de órganos. Las transfusiones, el embarazo y trasplantes previos son situaciones que exponen a un paciente a que se generen dichos Ac. CROSS MATCH CONTRA DADOR

Reacción Mantoux – intradermoreacción (PPD) ¿PARA QUÉ SIRVE? Respuesta a vacuna BCG en niño Evaluación de contacto reciente con TBC en adultos Estudio de la respuesta inmune celular in vivo (pacientes sospechados de padecer IDP) Estudio de pacientes con hipersensibilidad

WESTERN BLOT TÉCNICA CUALl. TATIVA ALTAMENTE ESPECÍFICA QUE PERMITE DETECTAR Ac O Ag. EN DIAGNÓSTICO SE EMPLEA EXCLUSIVAMENTE COMO TÉCNICA CONFIRMATORIA PARA INFECCIÓN POR HIV Extracción de proteínas + sueros de pacientes SDS-PAGE Transferencia a membranas (reactivo comercial) Tiras de nitrocelulosa con Ag virales DETECCIÓN DE Ac EN PACIENTES CON ELISA POSITIVO CONFIRMA DIAGNOSTICO + anti-Ig. G humana marcada con enzima revelado