LAB HEMATOLOGA 2011 RECUENTOS CELULARES Pueden ser Manuales

LAB HEMATOLOGÍA 2011 RECUENTOS CELULARES

� Pueden ser: Manuales o automatizados. � Materiales: � Cámara de Neubauer � Pipetas de Thoma � Tips � Pipeta automática � Diluyente � Microscopio � Aspirador o pipetor.

CÁMARA DE NEUBAUER � Esta hecha de vidrio óptico. Especial de precisión. � Base rectangular y gruesa. � En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales. � La superficie del puente central es más profunda que los dos puentes exteriores. � En el puente central (fondo de la cámara) están grabadas las redes de conteo.

� Cuando se coloca la cubrecámara:

PIPETAS THOMA � Pipetas de leucocitos perla blanca 0. 5 � 11 Pipetas de rojos perla roja 0. 5 101

DILUCIONES � Blancos: 1: 20 (0. 5 + 9. 5 ) � 10 u. L+190 u. L/10 u. L= 20 � 20 u. L+380 u. L/20 u. L= 20 � Rojos: 1: 200 (0. 5 + 99. 5) � 5 u. L+ 995 u. L/10 u. L = 200 Cantidades exactas � Evitar burbujas � Mezclar gentilmente y descartar 3 gotas � Soluto + solvente soluto

� � � Colocar la punta de la pipeta de Thoma en el borde Empezar a llenar la cámara y por capilaridad se llena la hendidura. Evitar el rebalse de la muestra. Sedimentar 2 -3 min. Contar

RECUENTO CELULAR

ACEPTABLE: diferencia 10%

LECTURA DE LA CÁMARA � Para recuento celular de góbulos blancos enfocar cámara en 10 X. � Para recuento celular de glóbulos rojos enfocar cámara en 40 X en el cuadrante de en medio.

CÁLCULO � RG/mm 3 = # células * FD * inverso de volumen # cuadrantes contados 20*10/4 = 50 (FACTOR BLANCOS) 200*250/5 = 10, 000 (FACTOR ROJOS)

EJEMPLOS � Leucocitos 1. Células contadas: 161 leucocitos 2. Superficie recontada: 4 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (1 mm x 1 mm x 0. 1 mm) 0. 1 mm 3 4. Dilución 1 : 20 R/ 8, 050 GB/mm 3 � Eritrocitos 1. Células contadas: 507 eritrocitos 2. Superficie recontada: 5 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (0. 2 mm x 0. 1 mm) 0. 004 mm 3 4. Dilución 1 : 200 R/ 5. 07*106 GR/mm 3

LIMPIEZA DE LA CÁMARA � Limpiar con agua o con una solución limpiadora suave. � Secar con un paño blando y acetona. � Las pipetas de Thoma se limpian con agua y se secan con acetona.

OBSERVACIONES Diafragma del condensador cerrado en su mayoría � Diferencia < 10 células entre cuadrantes � Realizar dobles determinaciones � Tener en cuenta que la cámara no esté reseca � Cámara limpia � Cubrecámara colocada correctamente � No tener burbujas de aire en el relleno de la cámara/pipeta � Cámara sobrellenada � Tiempo de sedimentación corto �