LAB 10 BACTERIAS DEL TRACTO UROGENITAL BIOL 3725

LAB #10 BACTERIAS DEL TRACTO UROGENITAL BIOL 3725 L

Quiz 9 Mencione 3 métodos rápidos para la identificación de bacterias: 1) 2) 3) Paree los siguientes resultados positivos con los medios de cultivo: 4) Bile Esculine Agar A) Enterohemorragico 5) Manitol B) Se producen burbujas 6) E. coli O 157 H 7 C) Cambia a fusha 7) Urea D) Cambia a amarillo 8) Enterolert E) Cambia a negro 9) Mc. Conkey F) Fluorescencia 10) Catalasa G) Fermentadores de lactosa

Objetivos Describir tracto urinario, función y componentes básicos. Familiarizarse con los organismos que comúnmente son responsables de infecciones en el tracto urogenital. Hacer cultivo de orina utilizando medios selectivos y diferenciales.

Tracto genitourinario Compuesto por una serie de órganos: Sistema urinario y aparato genital. Los sistemas urinario y genital están bien relacionados anatómicamente (proximidad y formación) Poseen diferentes funciones

Tracto urinario Compuesto por 4 partes básicas: � Riñón, vejiga, uréteres y uretra Se divide en dos grandes secciones: superior e inferior. � Parte superior riñones= filtración de la sangre (forma de orina) y mantenimiento de la homeostasis del agua y electrolitos y la producción de hormonas importantes en la formación de electrolitos. (usualmente son estériles) � Parte inferior: uréteres, vejiga y la uretra. Su función principal radica en la recogida, transporte, almacenamiento y excreción de la

Ultrafiltración de la sangre: producción de orina La sangre entra al riñón, se filtra, sale en forma de orina por los tubos finos llamados uréteres, esta orina llega a la vejiga en donde se almacena hasta el momento de ser eliminada por la uretra. Un adulto promedio produce de 1 a 2 litros de orina diariamente.

Microorganismos en el tracto urinario Normalmente es un ambiente libre de microorganismos. Al estar presentes, es indicativo de infección. Genitales y hasta uretra – bacterias flora normal Riñón, vejiga y uréteres: Infección crónica o aguda Infección crónica- Enfermedad en la cual los síntomas son más leves, se desarrolla más lentamente y dura mucho tiempo. Infección aguda -Enfermedad en la cual los síntomas se desarrollan y se dispersan rápidamente. Infección de este tracto puede causar:

Organismos causantes de infecciones urinarias Escherichia coli (women of childbearing age) Proteus spp. Pseudomonas aeruginosa and others spp. Enterococci Candida albicans Hemolytic streptococci Staphylococcus aureus Mycobacterium tuberculosis

Microorganismos causantes de infecciones urinarias

Agentes causantes de enfermedades del tracto urinario

Síntomas asociados a la infección tracto urinario Sensación de dolor o quemazón al orinar Frecuentes deseos de orinar Olor fuerte, turbidez en la orina, presencia de sangre, solidos Dolor de espalda, fiebre, nauseas, vómitos

Muestra de orina con infección Contiene células blancas: leucocitos ocasionales, células epiteliales, mucosa, bacterias y cristales de varias clase. Organismos coagulasa negativo Enterococci Proteus Hemolytic streptococci Yeast Aerobios. Bacillos formadores de esporas Gram +

Pasos para efectuar un análisis completo de microorganismos en la orina Colección aséptica de la muestra Evaluación cuantitativa Aislación de patógeno Identificación de patógeno Pruebas de sensitividad antimicrobiana

Métodos para determinar infecciones urinarias Tradicional Limpiar genitalia externa Colección orina en envase estéril Evaluación clínica Directamente de la vejiga Limpiar genitalia externa Insertar catéter hasta la vejiga y tomar la muestra Evaluación clínica

Medios utilizado para muestras de orina Enterococcus faecalis on a blood agar plate. Medio a utilizarse: 1. TSA Escherichia coli (larger, pink) and Proteus vulgaris (smaller, brown) on Mac. Conkey.

Crecimeinto en plato, cuantificación y determinación del microorganismo Método convencional: La muestra de orina es estriada sobre el medio sólido con un “loop” calibrado (volumen conocido) Muestra turbia hay que hacer dilusión 1: 1000 Cada Después de la incubación (37 grados C) se determina el # de organismos por ml. CFU dilución se crece en un plato con medio / ml = # organismos x factor dilución Se aíslan organismos y se identifican.

Evaluación clínica Requiere determinación cuantitativa de microorganismos/ml de orina >100, 000 cfu / ml (105): infección urinaria 1, 000 -100, 000 cfu / ml : posible o probable infección (debe repetirse la muestra) 0 – 1, 000 cfu /ml orina generalmente normal

Método menos convencional Bacturculture tube Método menos convencional y más rápido. Es un tubo plástico estéril desechable Cubierto en su interior con un medio especial que permite la detección de infección y la posible bacteria causante.

Cuantificación de bacterias: Bacturculture tube Después de la incubación puede detectarse con un “bacterial count”. Se coloca la tirilla de contar alrededor del “Bacturcult tube” sobre un área de distribución uniforme de colonias y se cuentan las que están dentro del círculo. El # de colonias promedio es interpretado de acuerdo al “Bactercult: Interpretation of Colony Counts”

Evaluación Clínica Bactercult Culture tube:

Identificación de colonias El medio contiene lactosa y urea y un indicador de p. H (rojo phenol). • Cambio de color (acción enzimática sobre el sustrato) Grupo I: E. coli y Enterococcus ; (amarillo) Grupo II: Klebsiella, Staphylococcus y Streptococcus ; (rosa a anaranjado) Grupo III: Proteus y Pseudomonas ; (rojovioleta)

Práctica Tomar una muestra de orina de forma aséptica. Observar la orina y completar la tabla De esa muestra se sacará con 1 m. L para realizar diluciones enserie en medio TSB. Luego incubar a 37 grados Celsius. Además se tomaran 5 m. L de la muestra original para esterilizar y guardarlos para la siguiente semana. Por último se incubará la muestra de la orina a 37 grados Celsius por 24 horas para compararlos con la muestra estéril.

Practica Cultivo de orina individual por estudiante 1) Turbidez de la orina 2) Incubación de la orina 24 hr Muestra de orina 10 ul loop Turbidez de la orina (inspección ocular) 37ºC/18 -24 hrs 37ºC/24 hr Calcule población

Posibles resultados

Práctica Cultivo de orina individual por estudiante 1) Turbidez de la orina 2) Incubación de la orina 24 hr Muestra de orina Turbidez de la orina (inspección ocular) 37ºC/18 -24 hrs 10 ml 37ºC, Calcule población 10 ml Descarte el liquido

Tabla # 1: Análisis macroscópico de la muestra de orina en el envase estéril Color Olor Muestra de orina original Muestra de orina 24 hrs después Tabla 2: Análisis de la muestra cultivada. # colonias color gas H 2 S fermentation Turbidez Particulado Sangre

REPASO ¿Qué organismos pueden ser causantes de infecciones en el tracto urinario? ¿Qué detalles se deben considerar al tomar una muestra de orina? ¿Qué métodos se usan para determinar infecciones en el tracto urinario?