LA DIMOSTRAZIONE CHE UNA SEQUENZA E UN SEGNALE
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LA DIMOSTRAZIONE CHE UNA SEQUENZA E’ UN SEGNALE PREVEDE ESPERIMENTI DI: 1. RIMOZIONE DELLA SEQUENZA 2. MUTAZIONE DELLA SEQUENZA 3. TRASFERIMENTO DELLA SEQUENZA SU UN’ALTRA PROTEINA
LE SEQUENZE SEGNALE DI LOCALIZZAZIONE NEL NUCLEO HANNO CARATTERISTICHE IN COMUNE PROTEINA SEQUENZA ANTIGENE T (SV 40) Pro-Lys-Lys-Arg-Lys-Val PROTEINA 72 k. Da (adenovirus) Pro-Lys-Lys-Lys-Arg VP 2/3 (polioma) Gln-Lys-Lys-Arg-Lys-Leu 70 k. Da (drosophila) Lys-Arg-Gly-Lys-Arg-Lys c-myc (pollo) Glu-Gln-Lys-Arg-Arg
LE SEQUENZE SEGNALE DI LOCALIZZAZIONE NEL NUCLEO HANNO CARATTERISTICHE IN COMUNE NLS NUCLEAR LOCALIZATION SIGNALS 1. SEQUENZE RICCHE IN AA BASICI PKKKRKV 2. ALL’INTERNO DELLA PROTEINA! 3. FREQUENTEMENTE BIPARTITE!!
LE SEQUENZE SEGNALE VENGONO RICONOSCIUTE DA RECETTORI SPECIFICI: LE IMPORTINE
SI POSSONO INDIVIDUARE PIU’ TAPPE NEL TRASPORTO NUCLEARE 1. PROTEINE SOLUBILI (IMPORTINE) RICONOSCONO LE NLS 2. IL COMPLESSO IMPORTINE-PROTEINA NUCLEARE SI LEGA ALLE PROTEINE DEL PORO (NUP) (RIPETIZIONI FG) 3. IL PORO SI DILATA ED IL COMPLESSO LO ATTRAVERSA 4. L’IMPORTINA SI DISSOCIA DALLA PROTEINA NUCLEARE 5. L’IMPORTINA TORNA NEL CITOSOL
ILLUSTRAZIONE SEMPLIFICATA DEL PASSAGGIO DI PROTEINE ATTRAVERSO IL PORO NUCLEARE CITOSOL NUCLEO
LA PROTEINA RAN E’ UN REGOLATORE CHIAVE DEL TRASPORTO DI PROTEINE NEL NUCLEO Nel nucleo RAN GTP GAP GEF RAN GDP Nel citosol
NLS proteina cargo Ran RCC 1 nucleo involucro nucleare citosol Ran GAP importina b proteina cargo NLS importina b
ANCHE L’ESPORTAZIONE DI PROTEINE DAL NUCLEO RICHIEDE SEGNALI NES NUCLEAR EXPORT SIGNALS 1. hn. RNP A 1 (38 RESIDUI AMMINOACIDICI) 2. hn. RNP K 3. PK 1 e Rev (RICCHE DI LEUCINA)
IL TRASPORTO NUCLEO>CITOSOL SI SVOLGE MEDIANTE TAPPE SIMILI A QUELLE CITOSOL>NUCLEO 1. PROTEINE SOLUBILI (ESPORTINA) RICONOSCONO LE NES 2. IL COMPLESSO ESPORTINA-PROTEINA NUCLEARE SI LEGA AL PORO 3. IL COMPLESSO ATTRAVERSA IL PORO 4. L’ESPORTINA SI DISSOCIA DALLA PROTEINA NUCLEARE 5. L’ESPORTINA TORNA NEL NUCLEO
esportina complesso cargo Ran cargo nucleo involucro nucleare citosol Ran GAP Ran cargo
IL TRASPORTO ATTRAVERSO IL PORO E’ BIDIREZIONALE
LE SEQUENZE SEGNALE POSSONO ESSERE MASCHERATE legame ormone NLS legame al DNA involucro nucleare CITOSOL NUCLEO