KYM 342 ENTRUMENTAL ANALZ KROMATOGRAFK YNTEMLER SIVI KROMATOGRAF

KYM 342 ENTRUMENTAL ANALİZ KROMATOGRAFİK YÖNTEMLER SIVI KROMATOGRAFİ (HPLC) -II

HPLC Analizi ile 1. Kalitatif Analiz 2. Kantitatif Analiz

1. Kalitatif Analiz Tekrarlanabilen, yeterli ayrışma sağlandıktan sonra ( A = 1. 5) yapılması gereken ilgili piklerin "tanımlanması ve pikin bir tek bileşene ait olduğunun kanıtlanmasıdır. Kromatografi bir ayırma tekniği olduğundan tek başın pikleri tanımlayamaz.

İlgili pikin hangi maddeye ait olduğu başka tekniklerle belirlenmelidir. Bunun için üç yol izlenebilir: 1. Kalma sürelerinin kıyaslanması: 2. Belli bir pikin belli bir maddeye ait olduğu tahmin ediliyorsa, örneğe o maddeden eklenir. İlgili pikin alanı artıyorsa tahmin doğrudur 3. Bilinmeyen piklere ait bileşenler kolondan geçtikten sonra toplanıp (preparatif analiz) • spektroskopi, • elementel analiz, • termal analiz, vb. tekniklerle tanımlanabilir.

Kalitatif analizde önemli bir problem "pik saflığı"dır. Bu nedenle pik saflığı mutlaka konfirme edilmelidir. Bunun için: 1. Birden fazla seri bağlı dedektör kullanılabilir. 2. En az iki dalga boyunda ölçüm yapabilen absorbans dedektörü kullanılabilir (pik saf ise iki ayrı dalga boyundaki dedektör sinyali oranı o pik boyunca sabit olmalıdır). 3. Photodiode Array dedektörleri kullanılabilir (PDA dedektörleri bir bileşe nin gerçek zamanlı spektral analizini yapabilirler; pik geldiği süre içinde alınan spektrumlar çakışık ise pik saftır).

1. Kantitatif Analiz Pikin büyüklüğü/Alanı orantılıdır örnek miktarı ile • derişimi • enjeksiyon hacmı pik alanını etkiler Pik alanı, , kaydediciden alındıysa; i. kesme/tartma ii. üçgen oluşturma iii. pik yüksekliği kullanma iv. planimetre kullanma • kromatogram integratörden/bilgisayardan alındıysa : direk sonuç

SK temelde bir kantitatif analiz cıhazı olduğundan derişimi bulunacak bileşen için, daha önceden derişimi bilinen örneklerle bir “Çalışma/Kalibrasyon grafiği" hazırlamak gereklidir. Kantitatif analizde iki temel yöntem vardır: a) Dış Standart Yöntemi b) İç Standart Yöntemi • HEDEF: BİR RAKAM • BU DEĞER *gerektiğinde tekrarlanabiilr * doğru olmalı

DIŞ STANDART YÖNTEMİ Artan derişimlerde standart hazırlanır Çalışma derişimi çok düşük aralıkta ise yüksek derişimde bir stokdan seyreltme ile hazırlanır Her derişimdeki standart için ayrı ölçüm alınır. Pik yüksekliği ya da pik alanına karşı derişim grafiğe geçirilir Derişimi bilinmeyen örneğin pik yüksekliği/alanı na karşılık gelen derişimi çalışma grafiğinden okunur