Kvalifikacija prehrambeni tehniar Nastavni predmet Prehrambena mikrobiologija vjebe

Kvalifikacija: prehrambeni tehničar Nastavni predmet: Prehrambena mikrobiologija, vježbe Razred: treći Naziv nastavne jedinice: Izolacija čiste kulture Ime i prezime autora: Ana Borko 6. IZOLACIJA I DETERMINACIJA MIKROORGANIZAMA Svaka površina u našem okolišu ispunjena je mikroorganizmima. Mikrobiolozi iz tih mješovitih populacija izdvajaju pojedinačne vrste kako bi ih lakše mogli proučavati – izoliraju čiste kulture. One sadrže samo jedan tip stanica. Čistu kulturu dobijemo precjepljivanjem. Precjepljivanje je prenošenje mikroorganizama s jedne hranjive podloge na drugu uz pomoć mikrobiološke eze, igle ili pipete, a hranjiva podloga može biti ista na kojoj se već mikroorganizmi nalaze ili neka druga. Svrha precjepljivanja (izolacije) je da nakon inkubacije pojedinačne kolonije budu dovoljno razdvojene na površini čvrste hranjive podloge. Precjepljivanjem vršimo inokulaciju tj- unošenje mikroorganizama na ili u hranjivu podlogu. Vježba 13. IZOLACIJA ČISTE KULTURE ISCRPLJIVANJEM PRIBOR: Petrijeve zdjelice, plamenik, šibice, sterilizator, inkubator, MKB eza HRANJIVA PODLOGA: hranjivi agar ili neka druga podloga UZORCI: mješovite kulture uzgojene na vježbama POSTUPAK: 1. Iscrpljivanje kvadratnim postupkom: Steriliziraj u plamenu mikrobiološku ezu do usijanja. Ohladi je u blizini plamenika kroz 1015 sec. Otvori Petrijevu zdjelicu s mješovitim kulturama te uzmi manji dio jedne kolonije. Otvori Petrijevu zdjelicu s novom hranjivom podlogom, prisloni ezu na podlogu i od ruba do ruba zdjelice nekoliko puta povuci po podlozi (s lijevom počni, s desnom završi). Ponovo steriliziraj mkb ezu, dodirni dio nanesene kulture, okreni Petrijevu zdjelicu za 90° i ponovo povuci po podlozi nekoliko puta (lijevo početak, desno kraj). Tako napravi i za dvije ostale površine - steriliziraj ezu, dodirni kraj nacijepljene kulture, povuci po podlozi, nakon posljednjeg povlačenja steriliziraj ezu i stavi je na stalak. 2. Iscrpljivanje cik-cak postupkom Steriliziraj u plamenu do usijavanja mkb ezu. Ohladi je u blizini plamenika kroz 10 -15 sec. Otvori Petrijevu zdjelicu s mješovitom kulturom te dodirni jednu koloniju. Otvori Petrijevu zdjelicu s novom hranjivom podlogom, nasloni ezu na površinu i povuci po cijeloj površini

cik-cak potezima. Ezu steriliziraj i vrati na mjesto. Stavi nacijepljene Petrijeve zdjelice u inkubator na 37°C, 48 -72 h. ZADATAK: Nacrtaj u bilježnicu porasle kolonije na hranjivoj podlozi.