Kpalkot eljrsok Spektroszkpiai alkalmazsok Mikroszkpok hagyomnyos optikai mikroszkp
- Slides: 33
Képalkotó eljárások Spektroszkópiai alkalmazások
Mikroszkópok hagyományos optikai mikroszkóp konfokális mikroszkóp fluoreszcencia-élettartam mérése Endoszkópok, távcsövek Fotoelektron-sokszorozó – sokcsatornás síkdetektor (photomultiplier) (microchannelplate detector) kapuzható képerősítő (gated image intesifier) Streak camera
Bazsalikom levél, szekréciós mirigy az epidermisz felszínén (a kék-zöld fluoreszcencia a sejtfal anyagok pl. , ferulasav, viaszok, illetve a flavonoidok fluoreszcenciaja) lexc= 351 nm lemi= 385 -470 nm kék 515 -550 nm zöld > 650 nm vörös 100 m
C A 32 m B D Sorghum levél felszine: lexc= 351 nm lemi= 385 -470 nm kék 515 -550 nm zöld > 650 nm vörös 100 m 32 m A B C D Fluoreszcencia réteg felvételek cirok levélen A felszínen a sejtfal alkotók kék-zöld fluoreszcenciája dominál, beljebb a fotoszintetizáló sejtek klorofilljáé.
Dane. Py infiltrált spenót levél, a felszíntől 15 m mélységben (mezofill sejtek) l em > 650 nm 505 nm < l em <550 nm l exc = 351, 364 nm, Ar laser
Összetett kép (zöld + vörös fluoreszcencia) és intenzitás eloszlás a jelzett egyenes mentén
Dane. Py infiltrált spenót levél, fotoinhibíciós kezelés 45 min után: • a levél fotoszintetikus aktivitásának kb. 2/3 -a elvész, • ha proteináz inhibitor jelenlében végezzük el a kísérletet, akkor kb 15% • D 1 protein károsodás detektálható • jelentős pigment bleach (total pigment) és lipid peroxidáció még nincs 0’ 15’ 30’ l exc = 351, 364 nm l em > 650 nm 505 nm < l em <550 nm 45’
A több-fotonos gerjesztés alapelve
Scales in Microscopy
Conventional light microscopy is limited by diffraction
Approaches in super-resolution light microscopy SIM (Structured Illumination Microscopy) STED (Stimulated Emission Depletion Microscopy) SINGLE-MOLECULE IMAGING Schermelleh L, Heintzmann R, . et. al.
Instrumentation
N-STORM implementation by nikon
Fluorescence lifetime imaging
Hőmérséklet-mérés foszforeszcenciaélettartam alapján
Fotoelektronsokszorozók
Fotoelektronsokszorozó működési elve
Microchannel plate detector működési elve
Kapuzható képerősítő működési elve
Példa a kapuzott képerősítő használatára
Streak camera működési elve
Streak camera használata fotokróm spirobenzopirán vizsgálatában
Egy felvétel
Quantum Efficiency (%) Typical Quantum Efficiency Curves 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 200 Back-illuminated ‘Virtual Phase’ Front-illuminated Micro. Lens front-illuminated Front-illumi Gen III+ 300 400 500 600 700 Wavelength (nm) 800 900 1000
Interline CCD
EMCCD enhancing conventional epi-fluorescence microscopy? No Gain EM Gain BODIPY No Gain Texas Red EM Gain