INTRODUCCIN A LA VIROLOGA Qu son los virus
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INTRODUCCIÓN A LA VIROLOGÍA
¿ Qué son los virus ?
Característica Virus Rickettsias Clamidias Micoplasmas Eubacterias Tamaño 20 -250 nm 1µm 300 nm 250 nm 0, 7 a 10µm Ácido nucleico ADN o ARN* ambos Fisión binaria No Sí Sí Enzimas del metabolismo energético No Sí Sí Ribosomas No** Sí Sí Replicación en medios axénicos No No No Sí Sí
ENTONCES, UN VIRUS ES • ÁCIDO NUCLEICO ADNdc ADNcs ARNdc • PROTEÍNAS (ESTRUCTURALES Y NO ESTRUCTURALES) • GLÚCIDOS Y LÍPIDOS
¿ Cómo se clasifican los virus ? • Los virus se agrupan en familias y éstas se dividen en géneros, que a su vez se subdividen en especies. • 1) Los criterios para definir una familia son: Tipo de ácido nucleico, características del mismo y mecanismo de replicación; Tamaño del virión y simetría de la cápside; Número de capsómeros en el caso de los virus desnudos o diámetro de la hélice en los virus helicoidales; Presencia o no de envoltura; Lugar de ensamble de las partículas virales; Forma de salida de la célula del huésped. 2) 3) 4) 5) 6)
Simetría viral Helicoidal o Icosaédrica
-Reoviridae: Rotavirus -Flaviviridae: Dengue, Fiebre Amarilla, HCV -Caliciviridae: HEV Togaviridae: Rubeóla -Picornaviridae: HAV -Coronaviridae: SARS-Co. V Filoviridae: Ébola -Rhabdoviridae: Rabia -Arenaviridae: Virus Junín Orthomyxoviridae: Influenza -Bunyaviridae: Hantavirus -Retroviridae: HIV, HTLV-I y II -Paramyxoviridae: Parainfluenza, Sarampión y Respiratorio Sincicial - -
-Parvoviridae: Parvovirus B 19 -Papovaviridae: HPV -Adenoviridae: Adenovirus -Poxviridae: Viruela -Herpetoviridae: HSV I y II, CMV, Epstein Barr y Varicela-Zoster -Hepadnaviridae: HBV
¿Los virus son seres vivos? • Carecen de vida independiente. • Fuera de una célula son metabólicamente inertes.
¿Cómo pueden inactivarse los virus? El conocimiento de la viabilidad de los virus en el medio ambiente y, por lo tanto, su sensibilidad o resistencia a diversos agentes físico-químicos sirve para: 1) determinar formas de transmisión y estimar la infectividad a temperatura ambiente 2) emplear métodos de desinfección 3) efectuar el tratamiento correcto de agua potable 4) conocer la viabilidad de muestras clínicas para diagnóstico virológico 5) optimizar la conservación de vacunas a virus vivo y atenuado
TEMPERATURA • Como regla general, la vida media de la mayoría de los viriones libres puede ser medida en: - segundos a 60°C - minutos a 37°C - horas a 4°C - días a -20°C - meses a -70°C - años a -196°C EXCEPCIÓN: - HBV - VIRUS ADENOASOCIADOS - VIRIODES
p. H Y MEDIO IÓNICO • Algunos virus pueden soportar un amplio rango de p. H y fuerzas iónicas. Ej: los enterovirus resisten el p. H ácido del estómago.
RADIACIONES • Radiación ultravioleta: Desinfección, inactivación vacunas • Radiación ionizante: Esterilización de materiales plásticos
SOLVENTES DE LÍPIDOS
ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN ESTERILIZACIÓN Ausencia total de microorganismos viables Estufa de esterilización – Autoclave – Óxido de Etileno o radiación ionizante DESINFECCIÓN Destrucción de la infectividad potencial de un material determinado Hipoclorito de sodio al 10% - Etanol al 70% - etc.
BIOSEGURIDAD: Conjunto de normas diseñadas para la protección del individuo, de la comunidad, así como del medio ambiente contra el contacto accidental con patógenos biológicos, químicos o elementos radioactivos. BARRERAS PRIMARIAS CONTENCIÓN BARRERAS SECUNDARIAS
BARRERAS PRIMARIAS
BARRERAS SECUNDARIAS
NIVELES DE BIOSEGURIDAD Nivel de Bioseguridad Agentes Infecciosos Criterios de Inclusión No se asocia a enfermedad en adultos inmunocompetentes sanos BSL 1 B. subtilis, E. coli, Varicela-zoster. BSL 2 Asociado a enfermedad humana y HAV, HBV, HCV, HIV, Parotiditis, transmisible por injuria percutánea, Sarampión, Influenza A, Salmonella, Legionella pneumophila, Penicillium sp. ingesta, o exposición de membranas o mucosas BSL 3 Fiebre Amarilla, SARS, antrax, Viruela, Fiebre tifoidea, tuberculosis, Histoplasma capsulatum. Asociado a enfermedad con potenciales consecuencias severas o letales para el ser humano y transmisible por aerosoles BSL 4 Dengue, Virus Junín, Ébola, Hantavirus. Alto riesgo de enfermedad letal en humanos y transmisible por aerosoles. Agentes con desconocido riesgo de transmisión.
BSL 3
BSL 4
PRECAUCIONES UNIVERSALES • Uso de guantes en todo procedimiento relacionado con sangre o fluidos corporales del paciente. • Uso de protección de mucosas (ocular, nasal, faríngea) mediante el uso de barbijos, antiparras, etc. , si se prevén salpicaduras de sangre u otros fluidos. • Uso de delantales impermeables en caso de contacto con sangre (cirugía, partos, etc. ). • Lavado cuidadoso de manos con jabón y antisépticos antes y después del contacto con el paciente o con cualquier muestra proveniente de éste (medida fundamental para prevenir la transmisión de agentes infecciosos). • Los instrumentos y superficies contaminados deberán ser descontaminados según las normas vigentes en cada institución. Habitualmente, para superficies contaminadas con material orgánico se emplea solución de hipoclorito de Na (8% cloro activo, por ejemplo: 250 ml cada 4 litros de agua). • Todo profesional de la salud debe recibir la vacuna anti-hepatitis B.
Enfermedades infecciosas de denuncia obligatoria en el país
REPLICACIÓN VIRAL
1. ADSORCIÓN 2. PENETRACIÓN 4. REPLICACIÓN DEL GENOMA VIRAL 3. DESNUDAMIENTO 4. TRANSCRIPCIÓN NÚCLEO 4. TRADUCCIÓN 5. ENSAMBLAJE 6. LIBERACIÓN
1. Adsorción Unión de una proteína de la cubierta viral (cápside o envoltura) llamada anti-receptor o proteína de unión con una molécula presente en la superficie celular o receptor. DETERMINA LA SUSCEPTIBILIDAD DE UN TIPO CELULAR A UN DETERMINADO VIRUS
2. Penetración El virus debe penetrar la membrana plasmática para atravesarla. • Virus envueltos: por fusión o por endocitosis mediada por un receptor • Virus desnudos: endocitosis mediada por receptor o formación de poros (poliovirus)
3. Desnudamiento • Es la pérdida de la cubierta externa viral (cápside o envoltura). • Puede ocurrir durante la penetración a nivel de la membrana plásmatica o en las vesículas endosomales; o a nivel de los poros de la membrana nuclear (herpesvirus y adenovirus)
4. Expresión y replicación del genoma a. Virus con genoma de ADN cd ARNm proteínas ADN cd ADN cs ARNm proteínas
4. Expresión y replicación del genoma a. Virus con genoma de ARN + proteínas ARN - ARN – (IR) ARN + ARN – ARN cd ARNm ARN cd proteínas ARNm proteínas
4. Expresión y replicación del genoma a. Virus con transcripción inversa ARN + ADN cd (integración) ARNm proteínas ARN + ADN cdp ADNcdc ADN cdp
5. Ensamblaje • Una vez que se ha sintetizado suficiente cantidad de proteínas y genomas virales, se pasa al ensamblaje de los distintos componentes para formar nuevas partículas virales. - Cápsides icosaédricas: se ensamblan las subunidades independientemente de la síntesis del genoma. - Cápsides helicoidales: agregado de subunidades proteicas alrededor del ácido nucleico.
6. Liberación • Es la salida de la célula infectada. - Virus desnudos: lisis celular - Virus envueltos: brotación para adquirir la envoltura
GENÉTICA VIRAL
DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR Replicación del ADN Transcripción inversa Replicación del ARN
Los procesos de replicación de los ácidos nucleicos son bastantes elaborados y la copia de la secuencia nucleotídica es extraordinariamente fiel, aunque, de vez en cuando, se pueda deslizar algún error.
TASA DE MUTACIONES ESPONTÁNEAS • Virus con genoma de ADN = 1 en 10 -8 a 10 -11 • Virus con genoma de ARN = 1 en 10 -3 a 10 -5 EL VIRUS DE LA HEPATITIS B (HBV) ES LA EXCEPCIÓN
CUASIESPECIES
EVOLUCIÓN VIRAL La variación genética observada en los virus a ARN es el resultado de, al menos, dos procesos diferentes: la generación de mutantes y su eficiencia competitiva frente a los demás virus de la población (fitness viral).
EVOLUCIÓN VIRAL • En el término de varias generaciones, la evolución de los genomas virales se verá influida, además, por: 1. MUESTREO AL AZAR
EVOLUCIÓN VIRAL 2. SELECCIÓN POSITIVA
INTERACCIONES GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Recombinación Ocurre en virus con genomas que consisten en una sola molécula de ADN o ARN. CUASIESPECIE 1 CUASIESPECIE 2 CUASIESPECIE 3
INTERACCIONES GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Reasociación genética Ocurre en virus con genomas segmentados.
• Reasociación: El caso del virus Influenza
INTERACCIONES GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Complementación MUTANTE LETAL 1 MUTANTE LETAL 2 POR RECOMBINACIÓN O REASOCIACIÓN
INTERACCIONES NO GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Heterocigosis
INTERACCIONES NO GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Interferencia La interferencia en el crecimiento de dos virus homólogos o muy relacionados se observa cuando alguno de los dos posee una ventaja sobre el otro.
INTERACCIONES NO GENÉTICAS ENTRE VIRUS • Mezcla fenotípica Ocurre en una célula infectada por un par de virus relacionados.
INTERACCIONES GENÉTICAS ENTRE LOS VIRUS Y LA CÉLULA HOSPEDADORA • Transformación: Capacidad de alterar la regulación del ciclo celular y generar tumores. • Integración: del genoma viral al genoma humano. • Infección persistente: cuando un virus lítico establece una infección persistente en una célula, debe cambiar para replicarse sin destruir a la célula hospedadora.
VACUNAS VIRALES
PROFILAXIS DE LAS INFECCIONES VIRALES
INMUNIDAD ACTIVA ARTIFICIAL • Finalidades de una vacuna PREVENIR UNA ENFERMEDAD, PERO… -La gran mayoría previenen sin evitar la infección. -Algunas vacunas se administran posterior a la infección: -por largo período de incubación (Rabia y Viruela) -para evitar consecuencias a largo plazo (HPV Y HSV)
TIPOS DE VACUNAS VIRALES 1. Vacunas con virus homólogo inactivado 2. Vacunas con virus homólogo vivo y atenuado 3. Vacunas con virus heterólogo 4. Vacunas desarrolladas con nuevas alternativas
VACUNAS INACTIVADAS • Pueden ser a virus completo, a subunidades o a VLPs ( «virus-like particles» ). • El virus inactivado es incapaz de replicar en el interior de la célula: actúa como un antígeno. • Se requieren varias dosis. Propiedades A virus inactivado o a subunidades Inducción de anticuerpos ++++ Linfocitos T citotóxicos CD 8+ - (habitualmente) Linfocitos T ayudadores CD 4+ ++++ Respuesta contra todos los antígenos virales Raramente Duración de la inmunidad Meses o años Riesgo de enfermedad -
VACUNAS A SUBUNIDADES RECOMBINANTE
VACUNAS A VIRUS VIVO Y ATENUADO • Presentan una disminución ostensible en su patogenicidad para el hombre pero conservan su inmunogenicidad. • Su inoculación produce una infección Propiedades A virus vivo y atenuado Inducción de anticuerpos ++++ Linfocitos T citotóxicos CD 8+ ++++ Linfocitos T ayudadores CD 4+ ++++ Respuesta contra todos los antígenos virales Habitualmente Duración de la inmunidad Décadas o años Riesgo de enfermedad +
FACTORES ESENCIALES A CONSIDERAR EN LA PREPARACIÓN DE VACUNAS Es imprescindible que el antígeno obtenido sea eficaz en su capacidad de inducir protección e inocuo. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. La inducción de inmunidad protectora El desarrollo de modelos en animales de experimentación La elección de la cepa viral La elección del sustrato para su replicación Los métodos de inactivación o atenuación La purificación La inmunogenicidad Los beneficios versus los riesgos de su aplicación al ser humano.
La inducción de inmunidad protectora VACUNAS A VIRUS INACTIVADO VACUNAS A VIRUS VIVO Y ATENUADO
El desarrollo de modelos en animales de experimentación Es imprescindible contar con modelos animales para reproducir las enfermedades virales humanas y así poder ensayar las vacunas antes de su aplicación al ser humano.
La elección de la cepa viral y el sustrato para replicación • El sustrato para la replicación de la cepa vacunal debe estar libre de otros patógenos. • Se debe elegir la cepa que: - tenga una historia conocida de pasajes (es decir, se haya replicado en un sustrato no contaminado). - contenga todos los antígenos prevalentes en las cepas circulantes en la comunidad.
Los métodos de inactivación y atenuación • La inactivación puede realizarse con formalina y calor, betapropiolactona o luz UV. • El proceso de atenuación es más complejo: - Búsqueda de mutantes atenuadas en la naturaleza - Adaptación del virus a un hospedador diferente del habitual - Reasociación genética entre cepas virales virulentas y atenuadas, y entre humanas y animales - Inducción experimental de mutaciones
Adaptación del virus a un hospedador diferente del habitual
La purificación y la inmunogenicidad • La cepa viral en la vacuna debe estar purificada de componentes celulares y no deberá contener otros virus de origen animal, ni contaminantes bacterianos o micóticos. • En la vacunas a virus inactivado, el agregado de un adyuvante sirve para aumentar la inmunogenicidad de la vacuna.
Beneficios versus riesgos de la vacunación
VACUNAS CON VIRUS HETERÓLOGOS • También llamadas «jennerianas» . • Se inoculan virus heterólogos, es decir antigénicamente relacionado al virus contra el cual se desea proteger.
NUEVAS ALTERNATIVAS 1) Oligodesoxinucleótidos (ODN) con islas Cp. G Secuencias nucleotídicas ricas en C y G Adyuvantes de vacunas 2) Vacunas a ADN Ausencia de agentes infecciosos, más estables, desarrollo más rápido, inducción de rta. inmune humoral y celular, vacunas para el control de infecciones crónicas. 3) Vacunas a virus recombinantes Emplea vectores virales 4) Plantas Transgénicas
INMUNIDAD PASIVA ARTIFICIAL
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