Interferencias en el anlisis de orina con tiras

Interferencias en el análisis de orina con tiras multirreactivas Sociedad española de Bioquimica Clínica y Patologia Molecular Química clínica 2000; 19 (1) Ana Santo Quiles

URIANÁLISIS ANORMALES Y SEDIMENTO ¿Cuando realizar urianálisis? - En pacientes con evidencia o sospecha de transtornos renales, urinarios, hepáticos y metábólicos - Por protocolos de hipertensión, DM… - Sospecha de infección de orina

CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA Composición sometida a múltiples variaciones (ppal vehículo de excreción) - Eliminación productos del metabolismo y sustancias extrañas (fcos y sus metabolitos) - Gran influencia de condiciones preanalíticas - Recogida (1ª hora, >4 horas en vejiga) - Almacenamiento (<2 h) - Dieta, Fármacos… - Características físicas: aspecto, color, olor volumen -

CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA - Composición sometida a múltiples variaciones (ppal vehículo de excreción) Eliminación productos del metabolismo y sustancias extrañas (fcos y sus metabolitos) Gran influencia de condiciones preanalíticas - Recogida (>4 horas en vejiga) - Almacenamiento (<2 h) - Dieta, Fármacos…

LA ORINA EN EL LABORATORIO DE RUTINA ORINA RECIENTE ALARMA Cobas u 601 ALARMA UF-1000 MICROSCOPIO

TIRA MULTIREACTIVA Cuadrados de material poroso con reactivos desecados para la determinación cualitativa o semicuantitativa PH LEUCOCITOS NITRITO PROTEINAS GLUCOSA CUERPOS CETONICOS UROBILINOGENO BILIRRUBINA SANGRE AREA DE COMPENSACION

ESPECTROFOTOMETRIA DE REFLECTANCIA ØSe usa para medir la intensidad de un espectro determinado en comparación con la intensidad de la luz procedente de una fuente LED(diodos patrón. emisores de luz): 470, 555, 620 nm Un LED proyecta luz a una longitud de onda definida, desde el ángulo pertinente, sobre la superficie de una almohadilla. La luz se proyecta en la almohadilla y se refleja con una intensidad que depende del color de dicha almohadilla. Un detector de fotodiodos recoge la luz reflejada y transmite una señal eléctrica que se transformara en valores relativos usando una escala estándar de calib.

AREA DE COMPENSACION Almohadilla blanca, sin reactivos, de las tiras reactivas usada para determinar el color de la orina y así intentar evitar falsos positivos a causa de que la muestra de orina tenga un color muy fuerte. Permite la compensación instrumental para el color intrínseco de la orina durante el análisis. Una interferencia importante será la sustancias que den color a la orina o que adquieran color al entrar en contacto con las zonas reactivas y enmascaren la coloración de la propia reacción

p. H Orina acida: • Acidosis ØRango (4, 5 -9) metabolica • Diarrea cronica + ØReacción ( dos indicadores) Directa con los iones H • Insuficiencia respiratoria rojo de metilo (de rojo a amarillo en rango de 4 -6) • Dieta proteinas azul de bromotimol (de amarillo a azul de rango 6 -9) ØSignificación clínica ØInterferencias Proliferación Bacteriana (urea amoníaco) Orina alcalina: • Acidosis tubular renal • Alcalosis respir. • ITU Excesivamente • Dieta vegetal y mojada citricos sol. Amortiguadora acida de zona prot

DENSIDAD RELATIVA ØDepende de la masa de solutos por unidad de volumen ØVN: 1. 003 -1. 035 ØEl riñón varía el vol de orina y su [solutos] para mantener homeostasis de los líquidos corporales y electrolítos ØReacción: Liberación de protones por un polielectrolito, en presencia de cationes, vira el color del indicador (azul de Positivas bromotimol) ↑[]cationes como Ca ØInterferencias↑[] proteinas Negativas Orinas alcalinas

PROTEINA ØRango ( NEG- 25 -75 -150 -500 mg/dl) ØSensibilidad 12 mg/dl Proteinurias de origen glomerular: ØComposición: Fisiológica excreción <0, 150 g • Glomerulonefritis ( 60% p. plasmáticas (40% alb) y • Patologia 40% p. uroteliales) vascular • Enf. Autoinmunes • Amiloidosis ØSignificación clínica • Neoplasias • Fármacos : AINE, IECA. . . ØReacción ( principio de error proteico de indicar de p. H) Indicador-H+ (Amarillo) + Prot (Alb) → Indicador (verde-azul) + Proteína-H+ (Solución amortiguadora p. H)

INTERFERENCIAS NEGATIVAS ØOrinas muy diluidas POSITIVAS ØFarmacos ØBacterias Con las tiras actuales, ORINA un p. H elevado (hasta 9) ØDesinfectantes con ALCALINA no afecta al test amonio cuaternario ØOrinas coloreadas Capaces de desequilibrar la acción de la solución amortiguadora que impregna la tira. ( hematuria, bilirrubina. . . )

LEUCOCITOS Ø Rango ( NEG-25 -100 -500 /µl) Ø Sensibilidad 20 leucocitos / • µl. Infeccion Ø Significacion clínica (fisiológico 0 -3/campo, 10µL) Ø Actividad enzimática de Esterasa de granulocitos Ø Reacción Ø • Inflamación Interferencias .

REACCIÓN LEUCOCITARIA Hidrólisis por la Esterasa leucocitaria Ester de ácido indoxilocarbónico Indoxilo Sal de diazonio Compuesto púrpura

INTERFERENCIAS POSITIVAS reac. cromatica NEGATIVAS reac. cromatica Ø Ø Ø Ascorbato Proteínas Glucosa Densidad Antibióticos Oxalato Malla impregnada con yodato que oxida al Ác. ascórbico y elimina la interferencia Ø Ø Ø Formaldehído Agentes oxidantes Orinas coloreadas (bilirrubina, hematuria. . . )

NITRITO ØSensibilidad 0, 07 mg/dl Infección bacteriana ØSignificación clínica (gramreducen nitrato • Dieta rica en hortalizas y a nitrito: E. coli, Kleb, Enterobacter, Citrobacter, Proteus) ØConsideraciones ØReacción de Griess ØInterferencias legumbres (nitratos) • Excluir antibióticos • Orina primera hora (>4 h en vejiga) No vale para gram+, enterococos, levaduras. .

REACCIÓN DE GRIESS BACTERIAS nitrato nitrito Amina aromática (Sulfanilamida) sal de diazonio Rosa rojizo quinolina

INTERFERNECIAS NEGATIVAS n n POSITIVAS n Reposo Ascorbato Urobilinógeno n Medicamento (color orina rojo) p. H bajo Micciones frecuentes

GLUCOSA ØGlu filtrada es reabsorbida en túbulo proximal • Diabetes Mellitus hasta un máximo. • Alteraciones ØRango ( NORM- 50 -100 -300 -1000 endocrinas mg/dl) ØSensibilidad 40 mg/dl • Enfermedad ØSignificación clínica pancreática • Fármacos ØReacción enzimática especifica ØInterferencias • Alteraciones metabólicas

REACCION 2 etapas Glucosa oxidasa Glucosa O 2 aire Gluconato H 2 O 2 + Cromóforo incoloro Glucosa peroxidasa No detecta lactosa, galactosa ni fructosa Compuesto coloreado

INTERFERENCIAS NEGATIVAS Ø Ø Ø Ø POSITIVAS Ascorbato Cetonas Ø Oxidantes potentes Salicilatos y derivados El uso de tetrametilbenzidina Acido nalidixico como cromóforo ha solucionado Densidad elevadade estas interferencias la mayoría Cefalosporinas Bacterias ( metabolizan la glu) Temperatura ( orinas refrigeradas pueden inhibir la reacción ya q es una reacción enzimática)

pulmones CUERPOS CETÓNICOS ØRango ( NEG-5 -15 -50 -150 mg/dl) • Causa Metabólica, DM • Factores dietéticos, ØSensibilidad 5 mg/dl inanición, malabsorción • Aumento de ØSignificación clínica: requerimientos metab ác. grasos • Vómitos, diarreas Nitroprusiato Na Reacción de Ph Legal AcØAcetoacético Compuesto >7 (grupo metilcetona) colorado

INTERFERENCIAS ACETOACETATO NEGATIVAS Ø Ø Ø Acetilsalicílico (oxida al ac. acetoacético) Bacterias (metabolizan el ac. acetoacético) Humedad (nitroprusiato pierde actividad) POSITIVAS Ø Ø Ø Ftaleinas ( uso en pruebas funcionales hepáticas y renales) Fcos con grupos sulfhídricos ( IECA, levodopa, acetlcisteína) Orinas coloreadas

BILIRRUBINA ØProducto metab grupo hemo (no conjugada unida a alb, en hígado es conjugada con ác. glucurónico y excretada con la bilis al intestino) ØRango ( NEG- 1 -3 -6 mg/dl) • Ictericia obstructiva ØSensibilidad 0. 6 mg/ dl • Cirrosis • Hepatitis ØSignificación clínica • Sind. Rotor y. Dubin Johnson ØReacción ØInterferencias

DIAZOREACCIÓN Sal de diazonio + UROBILINOGENO BILIRRUBINA medio ácido Compuesto azoico rosa-violeta

INTERFERENCIAS NEGATIVAS Ø Ø POSITIVAS Ø Fcos q colorean orina Ascorbato Nitritos Fcos Tiempo y temperatura (inestable y sensible a la luz)

UROBILINOGENO • Anemias ØRango (NORM-1 -4 -8 -12 mg/ dl) hemolíticas • Insuficiencia ØSensibilidad 1. 4 mg/dl hepática • Extravasación ØSignificación clínica sanguínea ØReacción mejor que R. Erlich ØInterferencias.

DIAZORREACCIÓN Sal de diazonio + UROBILINOGENO ph< 7 Compuesto azoico rojo

INTERFERENCIAS NEGATIVAS Ø Ø Nitritos Tiempo (fotooxidación) POSITIVAS Ø Fcos q colorean orina

SANGRE ØRango (NEG -10 -25 -50 -100 -150 -250 /µl) ØSensibilidad 7 eritrocitos/µl. (Detecta eritrocitos • Enfermedades intactos, lisados, hemoglobina, mioglobina y cilindros hemáticos) ØSignificación clínica ØReacción ØInterferencias. glomerulares • Litiasis • Neoplasias • Infecciones (cistitis. . . ) • Fármacos (anticoagulantes) • Traumatismo

REACCIÓN Actividad Peroxidasa grupo Hemo Peróxido de hidrógeno Oxigeno (presente en la zona reactiva) Cromóforo reducido Cromóforo oxidado (coloración azulverdosa)

INTERFERENCIAS NEGATIVAS Ø Ø Ascorbato (propiedades reductoras) Nitritos Proteínas Aceptores no específicos del oxigeno (ácido úrico. . . ) POSITIVAS Ø Ø Presencia de oxidantes Peroxidasas microbianas

UF-100 CITOMETRIA DE FLUJO Ø Citómetro de flujo con enfoque hidrodinámico que a través de 2 canales, uno para bacterias y otro para el resto de células, y previa tinción fluorescente, cuenta las partículas de la muestra integrando 3 señales de medición: tamaño, estructura y fluorescencia ØAnalizan células en suspensión que interfieren de forma individual con una fuente de luz provocando la emisión de señales luminosas que permite diferenciar poblaciones celulares dentro de la muestra analizada. ØDos tinciones con colorantes fluorescentes ØCanal exclusivo de bacterias

PARAMETROS ANALISIS ALARMA ØEritrocitos (0 -4269/µl) ØLevaduras ØLeucocitos (0 -3724 /µl) ØCilindros patológicos ØCélulas escamosas (0 -147 /µl) ØCélulas redondas pequeñas ØCilindros (0 -50 /µl) ØCristales Ø Bacterias (199 -12762 /µl) ØEspermatozoides

COMPARACIÓN CON EL MICROSCOPIO UFC MICROSCOPIO OBSERVACION Cast positivo No se observan cilindros La centrifugación los rompe. Mucus Si no hay proteínas, clasif errónea Levaduras Eritrocitos Clasificación errónea WBC Leucocitos y trichomonas No detecta trichomonas Cristales negativos Cristales Alta concentración de hematíes Abundantes bacterias o cristales de oxalato cálcico Clasificación errónea Los WBC, cuerpos grasos o cristales de fosfato pueden ser erróneamente clasificados como SRC. (Alarma SRC Microscopio)

muchas gracias por vuestra atención!!

p. H VN: 4, 5 -8 Valorar con el resto de parámetros

p. H • • • • p. H: Refleja la capacidad renal para mantener una concentración adecuada de hidrogeniones • En los adultos sanos varía entre 4. 5 y 8. – ↓: • Tras ayuno nocturno • Acidosis • Dieta proteica • Deshidratación • Diarrea • Bacterias productoras de ácido – ↑: • Tras comidas • Alcalosis • Dieta vegetariana • Vómitos • Bacterias que degradan urea (p. e. Proteus )

PROTEÍNAS • • – Los individuos sanos excretan aproximadamente 100 mg/dia de proteínas. – El glomérulo normal solamente es permeable a proteínas con peso molecular <20 k. D. Una vez filtradas, las proteínas se reabsorben en el túbulo proximal. – Transitoria: ejercicio físico intenso, embarazo, frio extremo, estrés, fiebre… – Persistente • Glomerular : No selectiva, predomina Albumina • Tubular : Predominan proteinas de bajo peso molecular (beta-2 -microglobulina) • Sobrecarga : Hemoglobinuria, Mioglobinuria, Bence- Jones

GLUCOSA – Hiperglucemia. – Umbral 180 mg/d. L – Existe en: DM, glucosuria renal, intolerancia a la glucosa, hipertiroidismo, hiperpitituarismo, sdme Cushing. .

CUERPOS CETÓNICOS – DM – Precozmente en niños en ayunas – Adultos con inanición – Ayuno prolongado (dietas extremas, anorexia nerviosa). - Si vómitos y diarrea. - Fiebre

LEUCOCITOS (PIURIA) Recomendable el cultivo microbiológico • Si negativo: inflamación no infecciosa • Si positivo infección aguda. – Sugestivo de infección los acúmulos leucocitarios. – En mujeres pueden aparecer por contaminación vaginal •

NITRITOS n n n Presencia de bacterias que reducen nitratos a nitritos. Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Staphylococcus, Pseudomonas… Bacterias que no dan positiva la reacción: (cocos gram positivos) Enterococci, Streptococci, o Staphylococci Puede haber infección y ser los leucos positivos y los nitritos negativos.

UROBILINOGENOBILIRRUBINA • • Urobilinogeno: Aumenta cuando existe un recambio excesivo de bilirrubina en los procesos hemolíticos y en una eritropoyésis ineficaz. Ausente en la obstrucción biliar completa. Bilirrubina: Aumenta en enfermedades caracterizadas por un excesivo recambio de Hb debido a una disminución de la vida media de los hematíes. Bb positiva y Ubg ausente característico de ictericia obstructiva.

SANGRE • • • Causas urológicas: traumatismos, litiasis, neoplasias, hiperplasia benigna de próstata, angiomas. . . Enfermedades generalizadas con predisposición a hemorragias: púrpuras, leucemias. . . Causas nefrológicas: glomerulonefritis, riñón poliquístico, vasculítis, infecciones. . .

ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO • • • Microscopía óptica Centrifugación 1500 -2000 rpm de un volumen de orina de aproximadamente 10 m. L de orina durante 5 min. Decantación del sobrenadante y agitación del sedimento. Gota entre porta y cubre. De menos a más aumentos.

n n Bacterias: Con forma de cocos o de bacilos. Trichomonas vaginalis: Movilidad. Estructuras redondeadas u ovaladas con flagelos. Hongos y esporas: Son incoloras de forma ovalada, algo más pequeños que los eritrocitos. Espermatozoides