Interaes AntgenoAnticorpo Ana Cludia Carvalho Gouveia Interaes Ag

Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia

Interações Ag - Ac Ligações não covalentes § Reversíveis §

Características das interações Ag-Ac Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

Características das interações Ag-Ac Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade - Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.

Características das interações Ag-Ac Reação cruzada - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

Métodos Reagentes não marcados (A ligação do Ac altera o estado físico do Ag) § § Reação de aglutinação Reação de precipitação Reagentes marcados § RIA § ELISA § IF, citometria de fluxo § Western Blotting

Reação de aglutinação (Ag insolúvel) Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos Passiva látex Qualitativos Ex. : classificação sanguinea Semi-quantitativos Ex. : detectar infecções

Tipagem sanguínea

Inibição da Aglutinação

Reação de precipitação - Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. - A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir. Precipitado visível

Precipitação em solução

Precipitação em gel Imunodifusão Radial

Precipitação em gel Imunodifusão Dupla

Reagentes marcados - Enzimas, fluorocromos, isótopos - Tipos: § RIA § ELISA § IF, citometria de fluxo § Western Blotting

Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas • Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Risco operacional (radiação)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada complexos imunes.

Imunofluorescência - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras chamadas fluorocromos. - Visualização em microscópio de fluorescência

Isotiocianato de fluoresceína (FITC) Ficoeritrina (FE) VERDE VERMELHA

Imunofluorescência Direta Aplicações: - Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); - Identificação de subpopulações de linfócitos; - Fenotipagem de células tumorais Ex. : Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral

Imunofluorescência Indireta Aplicações: - Detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos; - Diagnóstico de doenças auto-imunes; Ex. : Detecção de Ac anti- T. cruzi Detecção de Ac anti-nuclear

Citometria de fluxo - Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; - As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

Citometria de fluxo - As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; - A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

CD 4 Aplicações: -Caracterização de populações celulares; CD 8 - Contagem de microrganismos; - Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; - Análise de proliferação celular. CD 19

Western Blot

Ensaios imunocromatográficos Teste rápido de HIV Diagnóstico de gravidez (Ac anti-HIV) ( detecção de beta HCG)

Técnicas de Biologia Molecular

Reação da Polimerase em Cadeia Amostra + Reagentes

RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

Termociclador

Detecção da Amplificação Eletroforese em gel de poliacrilamida Produto (PCR ou RT-PCR)

Relatório 1. Qual a principal diferença imunofluorescência? entre os métodos de ELISA e 2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida. 3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno? 4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J. A. C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida. 5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.