INNOVATION WITHIN About Us Innate Immunity Cell Culture

INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Workshop Cancéropôle GSO / SFTCG Thérapies cellulaires et géniques : de la preuve de concept jusqu’à l’essai clinique Le développement d’un Médicament de Thérapie Génique: retour d’expérience Fabienne VERNEJOUL (Invivo. Gen) 25/03/2010

La société Invivo. Gen INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Toulouse / San-Diego 70 employés et un revenu de 12 M€, le groupe Invivo. Gen travaille pour environ 15 000 clients à travers le monde. Depuis le 1 er Janvier 2014, les activités de Cayla sont regroupées sous le nom de Invivo. Gen. 25/03/2010

Activités principales du site de Toulouse INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Production d’antibiotiques de sélection et de contamination Production d’actifs cosmétiques (BASF healthcare) Production de réactifs de laboratoire (Invivo. Gen) Immunité innée (signalisation PRRs: TLRs) Clonage et expression de gènes Culture cellulaire et transfection 25/03/2010

Autres activités: les Biothérapies INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Depuis 15 ans, Invivo. Gen recherche et développe des produits en thérapie génique et immunomodulateurs Anticorps monoclonaux (R&D) Thérapie génique non-virale Agents de complexation (Lyo. Vec™, Adi. Fectin™, Pamadi. Fectin™) Gènes synthétiques (ADN sans Cp. G) Production d’ADN à grande échelle Gènes suicides (Fcy: : fur/5 -FC, Cod. A: : upp/5 -FC) DCK: : UMK/Gemcitabine (brevet) 25/03/2010

INNOVATION WITHIN Le Principe About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Gemcitabine (GEMZAR®): prodrogue traitement palliatif pour le cancer du pancréas. Thérapie Génique multiple/double - gène aux propriétés anti-oncogéniques et anti-métastatiques (SST 2 R) - fusion de gènes (DCK: : UMK) aux propriétés chimio-sensibilisantes à la gemcitabine (d. Fd. C) SST 2 récepteur Cellules Tumorales Pancréatiques d. Fd. C P d. Fd. CMP P d. Fd. CDP d. Fd. CTP-ADN Gemcitabine DCK: : UMK CYL-02 : complexes lyophilisés in vivo Jet-PEI™ / ADN (SST 2 R+DCK: : UMK) 25/03/2010

La preuve de concept INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy * Modèle syngénique chez le Hamster (allogreffe hétérotopique) MDS, Inc. 25/03/2010

Développement (1): ADN médicament INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy ü ADN plasmidique (agrément CGG) • Promoteurs hypoxie-sensibles (environnement tumoral) • Squelette de 1ère génération (IRES avec gène de résistance) • Squelette de 2ème génération (gène de résistance isolé) ü Optimisation de la souche bactérienne productrice (agrément HCB) Souche dérivée d’Escherichia coli K 12 (classe 1) • Aucune pathogénicité ni toxicité vis-à-vis de l’homme et des animaux. • Pas de menace pour l’environnement. • Pas de possibilité de dissémination. Banques Cellulaires (selon Pharm. Europ. ) Souche sécurisée ü Procédés de Fermentation/ Extraction/ Purification • Production en bioréacteurs de 20 L Amélioration du titre en plasmide ü Contrôles de la substance active • Libération du lot (mise en place du système AQ) 25/03/2010

Développement (2): préparation du MTG INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy ü Evolution des formulations 1ère génération de complexes : Extemporanée (Formulation directe avant injection) Problème de reproductibilité Non acceptable en phase II/III 2ème génération de complexes : Complexes en solution Homogénéité des lots Problème de stabilité en solution 3ème génération de complexes : Complexes lyophilisés Homogénéité des lots Stabilité colloïdale (nanoparticules 80 -100 nm) Simplicité d’utilisation (prêt-à-l’emploi) 25/03/2010

« Contraintes » de la Formulation BPF INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Formulation des complexes (selon les normes BPF) Choix de la forme (Jet. PEI™ en poudre ou solution? ) Choix des concentrations de travail (4 dosages) Cinétique et sens de mélange (vortex grande échelle) Reproductibilité des lots (peu d’essais possibles) Lyophilisation Choix d’un excipient physiologiquement compatible Remise en suspension immédiate à température ambiante Conservation de l’activité biologique Maintien de la stérilité Pas de stérilisation finale possible Deux principes actifs stériles Travail en ZAC Classe A 25/03/2010

INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy 1995 2000 2004 2006 2007 2008 2009 2010/2012 R&D Preuve de Concept Scale-up Discussions avec l’ANSM et agréments Etude de toxicité Dépôts de brevets Soumission des dossiers (DME) Production BPF Phase I/II Ther. GAP 1 25/03/2010

INNOVATION WITHIN Essai Ther. GAP 1 About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Etude pilote de Thérapie Génique de l’Adénocarcinome Pancréatique localement avancé par injection intratumorale de complexes in vivo-jet. PEI™/ADN à activité antitumorale et sensibilisante au GEMZAR® Cancer du pancréas (95% des cas: adénocarcinome) 4ème cause de décès par cancer Ther. GAP 1 (2010 -2012): Escalade de doses (4 dosages de CYL 02) 22 patients traités Bonne Faisabilité Pas d’EIG Bonne tolérance Sécurité/innocuité du MTG 25/03/2010

Impact du projet Ther. GAP 1 INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Mise en place d’un service Assurance Qualité Rédaction de procédures et documents associés Qualification/Validation du matériel Amélioration de la qualité pour la production de la gamme de réactifs Invivo. Gen (objectif de certification ISO 9001) Perspectives: poursuite de l’ évaluation clinique (Ther. GAP 2) Conséquences du changement de réglementation : Invivo. Gen n’est pas établissement pharmaceutique. Dépôt d’une demande d’autorisation et déclaration des activités relatives aux MPUP (matières premières à usage pharmaceutique). Préparation de la substance active ADN plasmidique. Le produit sera formulé et conditionné par un sous-traitant qui a le statut d’établissement pharmaceutique (transfert procédés de fabrication) 25/03/2010

INNOVATION WITHIN About Us • Innate Immunity • Cell Culture & Transfection • Cloning & Gene Expression • RNA Interference • Cytokine Signaling • Ig. A • Cancer Research & Gene Therapy Prof. Gérard Tiraby (PDG) Prof. Louis Buscail (PU-PH) Daniel Drocourt, Ph. D (Biologie moléculaire) Gilles Cambois (Production) Mathieu Maligoy, Ph. D (Fermentation) Nicolas Ricard (Assurance Qualité) Fabian Gross (CIC Biothérapies) Contact : Fabienne VERNEJOUL, Ph. D Chef de projets R&D (in vitro et in vivo) Invivo. Gen +33 (0)5 62 71 69 39 vernejoul@invivogen. fr www. invivogen. com 25/03/2010