IDENTIFICATION DES COCCI GRAM LES COCCI A GRAM

IDENTIFICATION DES COCCI GRAM+

LES COCCI A GRAM+

TAXONOMIE ET CLASSIFICATION Les staphylocoques appartiennent à la famille des micrococcaceae qui comprend quatre genres qui diffèrent par la composition en base de leur ADN G+ C (mol %) - Micrococcus - Staphylococcus - Stomatococcus - Planococcus

LES STAPHYLOCOQUES • Cocci Gram positif en amas ou diplocoques • Aérobie, cultive facilement colonies blanches ou pigmentées en jaune • Genre Staphylococcus : 43 espèces – Staphylocoque coagulase positif : S. aureus – Staphylocoque coagulase Négatif : nombreuses espèces

• Staphylocoque coagulase positif : = Staphylococcus aureus – Facilement identifiable par des kits d’agglutination (CF, Proteine A, . . ) – Virulence +++ – Sécrétion d ’enzymes (Coagulase libre, liée, DNAse), et de Toxines (entérotoxines, PVL) • responsable d’infections communautaires ou nosocomiales

• Staphylocoque coagulase négatif : = nombreuses espèces – (S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. capitis, …) • Beaucoup moins virulent, responsable d’infections nosocomiales • Identification biochimique si rôle possible dans une infection

Staphylococcus Définition du genre amas à Gram positif de taille moyenne, en Coques Non exigeants + Catalase AAF Fermentatifs du glucose et du fructose CARACTERES DIFFÉRENTIELS DES PRINCIPALES ESPECES de Staphylococcus

Type respiratoire (étude avec O 2 de l’air) Test : On utilise une gélose VF liquide : on ensemence en spiral avec une pipette pasteur et on refroidit à l’eau froide (puis incuber à 37°C 24 h) Résultats : A : aéro-anaérobie facultative B : aérobie strict C : micro-aérophiles D : anaérobie strict AAF

2 - Etude des enzymes respiratoires : catalase +oxydase - Technique de la recherche du Catalase 2 H 2 O 2 + - S’il y a effervescence Cat + - S’il y a absence d’effervescence 2 H 2 O Cat -

II- Etude du métabolisme glucidique: Voies d’attaques des Glucides Etude effectué sur milieu Hugh et Leifson : milieu semi liquide contenant un indicateur de PH : le Bleu de bromothymol ou le rouge de phénol. -Les bactéries peuvent utilisées le Glucose selon 2 voies: §Voie Fermentative : la Réaction se déroulent en absence d’oxygène provoquant une baisse de p. H du milieu suite à la formation d’acide § Voie Oxydative: l’oxygène de l’air est obligatoirement utilisé , donc il y a peu d’acide formé et l’acidification aura lieu uniquement à la surface

Le milieu reste tel qu’il était avant ensemencement. Il n’y a pas de culture. Les bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose - Technique Aucun virage dans les 2 tubes Germe inactif vis à vis du Glucose Virage au jaune débutant dans le tube ouvert Incubation Ouvert Milieu Hugh et Leifson + Glucose Ensemencement (+ 48 h à 37°C Virage de l’indicateur de p. H au jaune dans tout le tube. Le milieu est devenu acide. Il y a eu production d’acides lors de l’utilisation du glucose par les bactéries en présence et en absence d’O 2. Fermé: Les bactéries sont Huile de paraffine) fermentatives vis-à-vis du glucose. Virage de l’indicateur de p. H au jaune dans la partie supérieure du tube. Le milieu est devenu acide. Il y a utilisation du glucose par les bactéries en présence d’ O 2. Les bactéries sont oxydatives vis -à-vis du glucose. Virage au jaune dans les 2 tubes

IV- Recherche de quelques enzymes 1 - Recherche de la Coagulase 4 gouttes plasma de lapin oxalaté 4 gouttes de la suspension Incubation au Bain Marie à Coagulase - 37°C de 2 à 24 h Suspension bactérienne en Bouillon Cœur Cervelle Exemple: S. epidermis: coagulase – S. aureus: coagulase + Coagulase +

2 - Recherche de la Désoxyribonucléase : DNASE ADN + H 2 O DNASE Nucléotides et/ou polynucléosides Absence d’un halot autour de la strie : DNASE + Hcl sur toute la surface de la boite Staphylococcus epidermis Présence d’un halot clair autour de la strie: Incubation 24 h à 37°C DNASE + Staphylococcus aureus

Présence d’une hémolysine (lyse hématies) Test : On utilise une gélose au sang, on réalise une strie longitudinale. Résultat : Zone verdâtre autour de la strie : Hémolyse α Auréole claire autour de strie : Hémolyse Aucune réaction : pas hémolyse

MILIEU CHAPMAN 1. Milieu d’isolement sélectif des bactéries du genre Staphylococcus (coques Gram + regroupés en amas)

une gélose Chapman avec des colonies de Micrococcus, S. epidermidis et S. aureus

Milieu Baird parker : pour coagulase positive, il met en évidence la lécithinase et la lipoprotéinase Test : à partir d’une culture de 24 h ensemencé les BP par strie (incuber 24 h à 37°C) Résultat : -colonie noire : réduction du téllurite en téllure. - halo claire : présence de protéolyse -précipité blanc : hydrolyse des lécithines par lécithinase Les staphylocoques coagulase + sont lécithinase + et protéolyse+