Identificacin de los principales compuestos de la Algarrobina

Identificación de los principales compuestos de la Algarrobina y productos del Perú Dra. Elen Cristina Quispe Chávez Laboratorio de Productos Naturales. IQRN. Universidad de Talca e-mail: equispe@utalca. cl ENCUENTRO CIENTIFICO INTERNACIONAL “CIENCIA, TECNOLOGÍA, ALTERNATIVA DE DESARROLLO AMAZÓNICO SOSTENIBLE – 2014 IQUITOS-PERU INNOVACIÓN,

Matricaria chamomilla Camelia sinensis Menta piperita Cinnamomum zeylanicum Erythroxylum coca Peumus boldus Fabiana imbricata Haplopappus sp

Producto natural HPLC extracto t(min) HPLC-DAD HPLC-ESI/MS-MS 3 5 5) +MS (618. 5), 5. 9 min 264. 0 x 105 1. 5 489. 0 1. 0 0. 5 0. 0 543. 0 207. 0 468. 0 x 105 2. 0 1. 5 1. 0 0. 5 0. 0 489. 1 600. 1 3) +MS 2(618. 6), 7. 7 min 1 200 300 IDENTIFICACION TENTATIVA DE COMPUESTOS 400 500 600 700 800 m/z

Algarrobina Algarrobos (Prosopis spp. ) Zona de productos aridos en el mundo www. unesco. org/mab/doc/ekocd/chapter 2. html ( World map of aridity zones © CRU / UEA, UNEP / DEWA

Algarrobina Algarrobos (Prosopis spp. ) Prosopis spp. Productos a base de frutos de Prosopis - Algarrobina, miel de algarrobina, arrope¨. - Patay: pasta dulce - Añapa: bebida no alcohólica - Aloja: bebida alcohólica

Chilean Prosopis pods showing the morphological variation according to species and collection place. A: Prosopis tamarugo F. Phil, B, D-G: Prosopis chilensis Stuntz, C: Prosopis sp.

Algarrobina Algarrobos (Prosopis spp. ) Tesis: Meza M, Vela S. Crema de Algarrobina 2009. http: //ingenieriambiental-tuplanetaverde. blogspot. com/p/flora_06. html

Preparación de muestras: Algarrobina Peruana Pasar por Amberlita XAD-7 s. Disolver en agua caliente filtrar Extracción y enriquecimiento en fenólicos ALGARROBINA Análisis de extractos HPLC-DAD-MS/MS

Elaboración de “huellas dactilares” (fingerprinting)

Identificación de los componentes en extractos HPLC – Espectrómetro de Masas Pre-tratamiento de muestras

Resultados Algarrobina-Perú Cromatograma de la fracción soluble en acetato de etilo, del extracto retenido en Amberlita.

Extracto metanólico de fracción retenida en Amberlita de “Algarrobina”-Perú Extracto metanólico de la fracción retenida en Amberlita de “Arrope de algarrobo”-Argentina

Jarabes de Algarrobo procedentes de Peru y Argentina Peru: P 1: Provincia de Lima P 2: Piura P 3: Lambayeque Argentina: AS: Tucumán

P 1 4 1 5 -hidroximetilfurfural 1 5 2 1 P 2 4 Vicenin II 4 5 6 P 3 7 8 Isoschaftosido 5 1 AS 9 Schaftosido 6

Identification of anthocyanidins in Prosopis pods meal (Puquio sample) by HPLC-DAD-ESI-MS data. Detection at 535 nm. Peak 1 2 3 4 5 6 7 8 Rt (min) 6. 2 8. 3 11. 1 13. 1 14. 6 18. 2 20. 8 24. 1 UV max (nm) 516, 425 sh, 279, 224 517, 321 sh, 278, 225 517, 30 7 sh, 285, 228 517, 320 sh, 279, 228 520, 319 sh, 270, 229 - [M]+ (m/z) 449 463 479 535 549 463 493 MS/MS (m/z) 287 301, 286, 258 420, 317 287 505, 301, 286, 258 331, 315, 270 Tentative identification Cyanidine 3 -hexoside Peonidin 3 -hexoside Petunidin hexoside Cyanidine malonoyl hexoside Peonidin 3 -hexoside Malvidine hexoside

HPLC-DAD chromatogram of the Amberlite-retained fraction from the methanolic extract from algarrobo mesocarp flour. A: Puquio, B: Road to Elqui; C: El Transito.

Identification of phenolics in Prosopis mesocarp flour by HPLC-DAD-ESIMS data. Detection at 255 nm. Peak Rt (min) 9 4. 8 10 5. 8 -6. 1 11 UV max (nm) MW [M-H] ‾ and ions Tentative identification - 464 463, 301 Ellagic acid hexoside 289, 228 372 371, 209, 163 Hydroxyferuloyl hexoside 6. 8 278 464 463, 301 Ellagic acid hexoside 2 8. 5 516, 278 447, 285 Cyanidin hexoside 12 14. 0 318 sh, 270, 226 478 477, 314 Ellagic acid methyl ether hexoside 13 15. 4 - 478 477, 314, 273 Ellagic acid methyl ether hexoside 14 15. 4 334, 270 594 593, 473 Vicenin II/Isomer 15 16. 7 334, 271 594 593, 473 Vicenin II/Isomer 16 20. 0 333, 270 564 563, 443 Schaftoside/isoschaftoside 17 20. 1 352, 262 626 625, 300 Q-dihexoside 18 24. 4 354, 268 sh, 254 623, 315 Q-methyl ether rhamnoside hexoside 19 26. 8 -27. 3 - 432 431, 311 Isovitexin 20 28. 3 352, 265 sh, 254 610 609, 301 Q-rhamnoside-hexoside 21 28. 6 349, 267 sh, 253 624 623, 419, 315 Q-methyl ether rhamnoside hexoside

Fruto y hojas de Vasconcellea quercifolia A. St. -Hil. Ayacucho Frutos de V. quercifolia Ceramica Huari http: //lailahuber. bloqspot. com Practicas chamanicas

EXTRACTO Columna XAD HPLC-DAD-MS HSCCC CONDICIONES HSCCC N-butanol/etil acetato/agua 3: 2: 5 Condiciones elución: Rotación: 800 rpm Flujo: 3, 0 ml/min Detección: 264 y 365 nm Vol. de inyección: 5 ml Recolección: 1 tubo/5 min CONDICIONES LC-MS Fases móviles fenólico A) 1% HCOOH en agua B) Me. OH Gradiente : 0 min 90 % A 20 min 75 % A 45 min 40 % A 50 min 25 % A 55 min 40 % A 60 min 75 % A 75 min 90 % A Columna Kromasil C-18 (250 x 4, 6 mm, 5 um) Flujo: 1, 0 ml/min Volumen de inyección: 20 ul.

Separación y aislamiento de compuestos fenólicos 900 g frutos EXTRACTO etanólico 77 g Maceración 24 h 2000 ml etanol Concentración Extracción 3 veces/30 min Reflujo (Etanol) Filtración

Aplicaciones de la Cromatografía en Contracorriente (CCC) Extracción Fracción apolar extracción Extracto resuspender 1 L agua Fracción polar Desengrase con 500 ml DCM (2 veces) 3 X 200 ml – Et. OAc 240 mg de extracto Et. OAc Sephadex LH-20 Monitoreo de fracciones 1 -40 Extracto Me. OH (1, 6 g) marron oscuro Fase acuosa Amberlita Eluir con Me. OH y Acetona

Aplicaciones de la Cromatografía en Contracorriente (CCC) Extracción Hoja extracción Hojas 0, 5 Kg 1 L etanol (3 veces) 4, 5 g de extracto metanolico (marron oscuro) Extracto + H 2 O 2 L Fase acuosa Amberlita Eluir con Me. OH y Acetona

Cromatogramas en HPLC del extracto crudo de Vasconcellea quercifolia antes y después de la adsorción en amberlita XAD-7. Detección: UV, 250 nm. Compusto : 2: Manghaslin; 5: Rutin. FRUTOS HOJAS 5 2 5

Cromatogramas de las fracciones obtenidas en HSCCC de los extractos de hojas de V. 5 quercifolia. Detección: UV, 250 nm. Compounds: 2: Manghaslin; 5: Rutin. Extractos de Hojas Fracción 51 -57 2 Fracción 60 -79 5

TIC y cromatograma de las fracciones seleccioadas de LH-20 de los extractos del fruto de Vasconcellea quercifolia. Detection: UV, 250 nm. Compounds: 2: Manghaslin; 5: Rutin. Fracción 8 -9 Fracción 13 -23

Full scan ESI espectro de masa y fragmentos de los derivados mangashlina. 757. 214

Espectro de masa y fragmentos de rutina. . x 105 303. 0 Intensity 2. 5 2. 0 1. 5 1. 0 611. 0 - hexose (162 u) 0. 5 465. 0 - rhamnose (146 u) 0. 0 300 350 400 450 500 m/z 550 600 650 700 [M+H]+

Full scan ESI espectro de masa y fragmentos de rutina. Figure 4. Full scan ESI mass spectra and fragmentation (MS 2) of the quercetin derivatives manghaslin (compound 2) (Figure 4 a) and rutin (compound 5) (Figure 4 b) unambiguously identified in Vasconcellea quercifolia by NMR spectroscopy.

Proposed fragmentation of the flavonol glycosides (m/z 625, 771, 741) (compounds 6, 3 and 1) tentatively identified in Vasconcellea quercifolia. [M+H]+ 625. 450 [M+H]+ 771. 440 [M+H]+ 741. 520

[M+H]+ 625. 450 [M+H]+ 771. 440 [M+H]+ 741. 520

Table 1. Tentative identification of phenolic compounds in Vasconcellea quercifolia fruit and leaf extract by LC-DAD, LC-MS and MS/MS data. For minor compounds, no UV data can be given. Retention time (min) λ Max (nm) MW [M + H]+ and MS/MS ions 34. 78 352, 300 sh, 260 sh, 255 756 757, 611, 465, 303, 252 Manghaslin* (M) 2 35. 10 - 784 785, 639, 287 Kaempferol rhamnoside diglucuronide 8 37. 20 346, 300 sh, 263 740 741, 595, 449, 287 Kaempferol 3 -(2”-rhamnosyl rutinoside) 1 37. 86 352, 255 770 771, 625, 479, 317 Isorhamnetin 3 -(2”-rhamnosyl rutinoside) 3 37. 89 - 517 518, 303 Quercetin glucuronide K salt 9 38. 00 355, 300 sh, 260 sh, 255 778 779, 633, 477, 331 Dimethoxyquercetin-dirhamnoside 156 39. 38 - 547 548, 333 Methoxymyricetin glucuronide K salt 11 39. 62 355, 300 sh, 260 sh, 255 610 611, 465, 303 Rutin* (M) 5 40. 64 350, 300 sh, 255 624 625, 479, 317 Isorhamnetin rutinoside 6 42. 43 - 501 502, 287 Kaempferol glucuronide K salt 7 44. 04 348, 300 sh, 264 593, 285 Kaempferol rutinoside 4 48. 54 - 531 532, 317 Isorhamnetin glucuronide K salt 10 Tentative identification *Identified by NMR, MS, UV spectra and comparison with a standard sample. M: main compounds. Compound Unknown

“Sancayo” Corryocactus brevistylus Crece en laderas de cerros, lugares pedregosos, arenosos y rocosos, con poca agua o humedad; y su área de mayor concentración de plantas está entre los 2. 500 a 3. 300 msnm.

Uso local del “Sancayo” Refresco de Sancayo

Recolección y tratamiento de la muestra Extracto metanólico

Resultados preliminares Isorhamnetin-3 -O-[α-rhamnopyranosyl-(1→ 6)-β-glucopyranoside

CONCLUSIONS - La identificación de los principales flavonoides en los jarabes de algarrobo da un valor agregado con características nutraceuticas. - La presencia del 5 -hidroximetil furfural en arrope de algarrobo debe ser investigado por posibles efectos tóxicos y mutagénicos. - Este es el primer reporte de los compuestos fenólicos de V. quercifolia que pueden ser utilizados como punto de partida para otros estudios de química de alimentos en Perú. - El estudio de frutas nativa como el Sancayo, podría ser una alternativa sostenible para la agricultura en las tierras semiáridas.

Agradecimientos Grupo de trabajo • Dr. Guillermo Schmeda Hirschmann • Prof. Cristina Theoduloz • Sergio, Irene (técnicos del laboratorio) • Instituto de Quimica de Prod. Naturales • Estudiantes de post-grado y pregrado. Organización Financiamiento FONDECYT 1120096 PBCT PSD 50

Muchas gracias por su atención equispe@utalca. cl elencris@yahoo. com