HROMATOGRAFIJA NA HARTIJI 1 Hromatografija na hartiji predstavlja

HROMATOGRAFIJA NA HARTIJI 1

Hromatografija na hartiji predstavlja hromatografsku metodu koja se zasniva na različitoj raspodjeli komponenata neke smješe između 2 tečne faze (koje se ne mješaju) Jedna faza NEPOKRETNA – raspoređena na nosiocu (hartiji), čvrsta supstanca ili tečnost Druga faza POKRETNA – gas ili tečnost 2

Razdvajanje RASPODJELE zavisi od KOEFICIJENTA Koeficijent raspodjele supstanci između 2 rastvarača koji se ne miješaju, predstavlja odnos između koncentracije supstance u pokretnom rastvaraču prema koncentraciji iste supstance u nepokretnom rastvaraču Zbog različitog koeficijenta raspodjele različite komponente neke smješe se raspoređuju u paralelnim zonama duž trake hartije i tako se razdvajaju 3

Podjela hromatografije na hartiji uzlazna Jednodimenzionalna silazna Dvodimenzionalna 4

Operacije kod hromatografije na hartiji Razlikujemo sljedeće operacije u hromatografiji na hartiji: 1) stvaranje hromatograma 2) razvijanje hromatograma 3) detekcija zona 4) eluiranje zona 5

Stvaranje hromatograma postiže se nanošenjem uzorka u obliku tačke ili crte blizu jednog kraja trake specijalane hromatografske hartije i otparavanjem viška rastvarača 6

Razvijanje hromatograma Prvo se hartija unese u zatvorenu komoru čiji je prostor zasićen smješom rastvarača koji služi za razvijanje Potom se dio hartije koji je najbliži nanesenom uzorku uroni u rastvarač Kod SILAZNE hrom. traka se vješa tako da visi preko posude s rastvaračem Rastvarač se kreće naniže dejstvom sile gravitaciji i kapilarnih sila 7

Kod UZLAZNE hrom. rastvarač se kreće naviše, suprotno gravitacionoj sili pa je visina do koje se popne manja nego u slučaju silazne hrom. 8

O DVODIMENZIONALNOJ HROMATOGRAFIJI se radi ako razvijamo hromatogram sa 2 različita rastvarača u 2 različita pravca na kvadratnoj hartiji Smješa koja se ispituje nanese se na jedan ugao hartije, osuši a potom uroni u smješu rastvarača Razvijanje se vrši prvom smješom rastvarača duž jedne strane, zatim se hartija osuši i ponovi razvijanje drugom smješom rastvarača pod uglom od 90° prema prvom pravcu 9

10

Detekcija zona 1. Razdvojene supstance se lako identifikuju ako su intezivno obojene ili ako se boje pomoću nekog hromogenog reagensa, ili ako apsorbuju ultravioletnu svjetlost 2. Poređenjem sa hromatogramima poznatih supstanci 3. Mjerenjem Rf – vrijednosti 11

TEHNIKA RADA Na mjestu P nanese se ispitivani rastvor Traka se okači u sud tako da polazna mrlja bude nekoliko milimetara iznad nivoa rastvora Zbog kapilarnih sila rastvarač difunduje u traku i penjući se povlači komponente smješe Zbog različite brzine kretanja, dolazi do razdvajanja komponenata A i B Nakon završetka traka se vadi i obilježava nivo F (front rastvarača) 12

Rf vrijednost predstavlja količnik pomjeranja date komponente i pomjeranja fronta rastvarača Interval kretanja Rf-vrijednosti se kreće 0<Rf<1 Rf je konstatna vrijednost za određenu supstancu na određenoj temperaturi https: //www. youtube. com/watch? v=23 W 5 Z_redfs 13

DOMAĆI ZADATAK 1. Kako se definiše hromatografija na hartiji? 2. Koje vrste faza se koriste u ovoj tehnici? 3. Od čega zavisi razdvajanje kod ove tehnike? 4. Kako se definiše koeficijent raspodjele? 5. Kako se dijeli hromatografija na hartiji? 6. Koje operacije razdvajanja se koriste kod ove tehnike? 7. Grafički prikazati kako izgleda hartija (hromatogram) nakon razdvajanja komponenata smješe ( A i B), ovom tehnikom. 14

HVALA NA PAŽNj. I ! 15