Groupage HLA et Cross Match G Perrat Laboratoire

Groupage HLA et Cross Match G. Perrat Laboratoire HLA Lyon

Rappels HLA Molécules de classe I : A, B, Cw Présentation de l’Ag aux lymphocytes T CD 8+ Molécules de classe II : DR, DQ, DP Présentation de l’Ag aux lymphocytes T CD 4+

Nomenclature HLA n Sérologie vs Biologie moléculaire u u u n A 2 A*02 B 7 B*07 DR 4 DRB 1*04 DQ 2 DQB 1*02 C et DP toujours en biologie moléculaire Sous types (Ag splits) u u u A 9 A 23 / A 24 B 12 B 44 / B 45 B 17 B 57 / B 58 B 22 B 54 / B 55 / B 56 DR 2 DR 15 / DR 16 DQ 3 DQ 7 / DQ 8 / DQ 9 ….

Identité en greffe d’organes RECEVEUR A 1 A 2 B 7 B 8 DR 4 DR 11 DQ 8 DQ 7 Ac anti A 23 A 24 A 25 A 32 DR 15 DR 16 DONNEUR 1 A 3 B 51 B 13 3 identités greffe autorisée DR 4 DR 13 DQ 8 DQ 6 DONNEUR 2 A 1 DR 4 DR 15 DQ 8 DQ 1 A 23 B 7 B 35 4 identités mais greffe interdite DONNEUR 3 A 11 A 31 B 15 B 27 2 identités greffe autorisée DR 11 DQ 5 DQ 7

Typage HLA n Biologie Moléculaire u u u u Technique de PCR-SSP Prélever 1 tube EDTA Transfert Gerland / Pav P Arrivée Gerland avant 16 h 30 Délai de rendu = 4 h 30 Limite = qualité de ADN Typage A, B, C, DR, DQ, DP n Sérologie u u u u Technique de LCT Prélever des ganglions ou 3 tubes ACD Transfert au pavillon P Transport à température ambiante Délai de rendu = 4 h 30 Limite = viabilité des cellules Typage A, B, DR, DQ Prévenir impérativement de l’heure d’arrivée des échantillons

Organisation 2011 n Jours ouvrables avant 16 H 30 (heure limite d’arrivée du tube) u Appel labo Gerland (04 72 71 17 45) u Tube EDTA impérativement envoyé à Gerland u Accompagné d’un bon demande examens n Nuits et week ends u Appel technicien d’astreinte (06 75 69 57 79) u Tube EDTA envoyés au pavillon P u Accompagné d’un bon demande examens

Lymphocytotoxicité + + Lymphocyte AC anti-Ag 1 C ’ (Ag 1) + Complexes Ag 1 -AC Lymphocyte lysé + Lymphocyte AC anti-Ag 2 (Ag 1) C ’ Pas de complexes : Ag 1, AC et C ’ restent séparés Lymphocyte indemne

Organisation de la LCT n Facteur important = Qualité des cellules Arrivée des échantillons Séparation des cellules Dépôt des cellules dans les plaques contenant les antisérums Incubation Ajout du complément Durée 4 H 30 Incubation Ajout du colorant et lecture TRAVAIL DANS UN SEUL LABO PAS DE CONDITIONS PARTICULIERES MATERIEL = MICROSCOPE, CENTRIFUGEUSE

PCR-SSP (amorces spécifiques de polymorphismes) AMPLIFICATION Amorces complémentaires Amorces non complémentaires amplification Pas d ’amplification CONTRÔLE (gel agarose 2%) POSITIF NEGATIF

Organisation de la PCR-SSP Arrivée des échantillons Extraction ADN Préparation de la réaction de PCR Amplification de l’ADN Durée 4 H 30 Contrôle de la migration sur gel Analyse sur table à UV Interprétation informatisée 2 ZONES DISTINCTES ET PHYSIQUEMENT SEPAREES CAR RISQUE DE CONTAMINATION MATERIEL = HOTTE, THERMOCYCLEUR, TABLE UV, GENERATEUR, INFOMATIQUE

Cross Match n Sérologie (LCT) n Cytométrie de flux Cellules issues du ganglion ou de rate (lymphocytes T et B) + sérum(s) du receveur u u Transfert rapide Délai de rendu t t u u 3 h si rec non immunisé 5 h si rec immunisé Test au DTT systématique = éliminer les Ig. M Examen pré greffe Sérum du jour doit être négatif XM positif sur lymphocytes T = greffe interdite u u Examen réalisé après la greffe pour les receveurs immunisés et avant la greffe pour les donneurs vivants Si positif : t t t adaptation du traitement immunosuppresseur pour les receveurs greffés Recherche de cause Refus du donneur pour les greffes avec donneur vivant Conservation de matériel biologique : ADN et cellules du donneur et du receveur