Genomisk typning av blodgruppsantigen Sahlgrenska Universitetssjukhuset Transfusionsmedicin 2012

Genomisk typning av blodgruppsantigen Sahlgrenska Universitetssjukhuset Transfusionsmedicin 2012 -2020 Sari Karlsson BMA 2019 -05 -28

Blodgruppssystem enligt ISBT § ca 300 olika blodgruppsantigen indelade i 35 blodgruppssystem. § Varje blodgruppssystem motsvaras av 1 gen eller en grupp (kluster) av 2 till 3 nära sammanlänkade gener. § Varje system utgör en separat genetisk enhet. § Antikroppar mot dessa antigen saknas normalt. Irreguljära (immuna) antikroppar kan bildas pga transfusion eller graviditet. 2

Typning av blodgruppsantigen i rutin § § Serologi (erytrocyter+reagens/antikroppar) Ig. G eller Ig. M antikroppar används Transfunderade patienter går ej att typa DAT positiva patienter går ej att typa med Ig. G reagens § Reagens svåra att få tag på 3

Genomisk typning § ID-Core XT § Kit med reagens inklusive mjukvaran för att tolka resultaten till sannolik fenotyp § 37 antigen Presentationens namn 4

5

6

DNA-framställning § Lysering § DNA binds till partiklar med silikonyta § Partiklarna separeras från lysatet med magnetkulor § DNA tvättas och elueras § Frysförvaras 7

Amplifiering 8

Hybridisering 9

Märkning 10

11

Avläsning 12

Homo/heterozygot antigen 13

14

Resultat § 37 sannolika fenotyper. § Genetiska varianter tex FYB_GATA, Jkb_null, S_null mm. Presentationens namn 15

16

FYB GATA § Duffy protein är receptor för Plasmodium Vivax § Fenotyp Fya- Fyb- (Afrika ca 65%) § Mutation i GATA box som förhindrar uttrycket av Fyb antigen på erytrocyternas yta. § Antigenet uttrycks på andra vävnader 17

Validering ID-Core XT September 2014 43 prover: § 33 tidigare känd fenotyp § 6 tidigare känd genotyp § 4 NIBSC kontroller 18

Resultat 4 avvikelser: § 3 prover M- serologiskt, M+ genomiskt (typades om, fel serologiskt) § 1 prov Lub- serologiskt, Lub+ genomiskt (utreds av Progenica) 19

Ackreditering § § Validering Externa kontroller 1 gång per år Interna kontroller Dokumentering, apparatur, material, behörigheter mm § Swedac kontrollbesök oktober 2016 20

Swedac 21

§ Valideringsrapport skrevs om § Ackreditering 2016! 22

Användningsområde § Blodsjukdomar (profylaktiskt samma: Rh, K, Jka, Jkb, Fya, Fyb, S, s) § Transfunderade patienter § Antikroppar mot publika antigen § Multipla antikroppar § DAT och IAT positiva § Panelgivare § Blodgivare med ovanlig fenotyp 23

Patientfall 24

Patientfall 1 § § § Man född 1951 Morbus Waldenström Blodgrupp 0 Rh. D pos Transfunderad Kroniskt transfusionsbehov 25

§ DAT (Ig. G och C 3 d) och IAT positiv § Transfusion på vital indikation § Transfusion med positivt MG-test Januari –Juli 15 enheter erytrocyter § Juli negativ MG-test med en enhet? 26

§ Genotypning av enhet och patient § Skickas till referenslaboratorium i Bristol § Profylaktisk antigen matchning 27

Antikropp Cartwright A § § Publikt antigen 99, 7% (Yta positiva) Oftast ingen signifikant HDN Oftast ej svåra transfusionsreaktioner Inget absolut krav på typade enheter vid blodbehov 28

Patienter med anti-Yta § Gravid kvinna AB Rh. D pos född 1982 § Man 0 Rh. D pos född 1961 Levertransplantation 29

Patientfall 2 § § § Gravid kvinna A Rh. D pos född 1975 Beräknad partus juni 2014 Positiv i alla testceller DAT negativ Fenotyp: Lub. Anti-Lub 30

Patientfall 3 § § § Gravid kvinna 0 Rh. D pos född 1988 Beräknad partus oktober 2014 Positiv i alla testceller DAT negativ Fenotyp: Lub. Anti-Lub 31

Patientfall 2 och 3 § § Genomisk typning Serologisk typning av partner Titrering Lub- blodgivare lämnar blod inför förlossning § Frysa ner Lub- enheter från givare 32

§ Endast en blodgivare 0 Rh. D pos fenotyp Lub§ Genomisk typning utfördes ID-Core XT § Resultat? § Genotyp och sannolik fenotyp Lub+! § Provet skickdes till Progenica, USA för sekvensering 33

34

§ In(Lu) sannolikt Lua- Lub- fenotyp på givaren enligt svar från Progenica. § Nyupptäckt variant publicerades. § Givaren kan användas vid blodbehov för både kvinnorna och deras nyfödda barn. 35

Lutheran b § Publikt antigen 99, 85% (Lub positiva) § Ingen eller mild HDN § Oftast inga svåra transfusionsreaktioner 36

Patientfall 4 Kvinna född 1970 § Blodgrupp 0 Rh. D pos § Levertransplanterad juli 2013: inga irreguljära antikroppar § Transfunderas med endast ett trombocytkoncentrat inför operationen inget övrigt transfusionsbehov § 37

§ § December 2013: anti-E + anti-Jkb Patient: DAT negativ E-, Jkb. Trombocytgivare: E+ Jkb+ Retrospektiv utredning av necrodonator: * inga antikroppar * genomisk typning: E+, Jkb+ 38

Patientfall 5 § § Flicka född 2003, 0 Rh. D pos Operation Maj 2018 Positiv i alla testceller i PEG IAT DAT negativ 39

§ Serologisk typning C-, c+, E-, e+, Fya-, Fyb-, Jka+, Jkb-, S- och s§ Genomisk typning U- (inga serologiska reagens finns) § Syskon/föräldrar? Kan ha samma genotyp och bli blodgivare. 40

U § Publikt antigen kaukasier 99, 9%, afrikaner 99% § HDN mild till svår § Transfusionsreaktioner mild till svår 41

Begränsningar § Kan detektera endast mutationer inkluderade i kitet och beskrivna i litteratur § Kan ej identifiera nya varianter § Varianter i andra gener (posttranskription) § Diskrepans mellan fenotyp och sannolik fenotyp kan uppstå i sällsynta fall 42

Framtid § Sökfunktioner. Är fenotyp och genotyp samma skall de skrivas in i vårt datasystem som likvärdiga? § Typa fler blodgivare (dyr metod) § Möjlighet till retrospektiv utredning vid immunisering tex efter transplantation § Fetalt Rh. D 2020? Ny metod för att typa fetalt RHD genomiskt på gravida kvinnans plasma. 43

Tack Genomisk typning 44