Folyadkkromatogrfia Csoportosits llfzis geometrija szerint Mozgfzis folyadk eluens

Folyadék-kromatográfia Csoportositás : Állófázis geometriája szerint Mozgófázis: folyadék (eluens) Állófázis: szilárd v. folyadék Oszlop-kromatográfia - HPLC Réteg-kromatog - Vékonyréteg-kr (TLC), - Papír-kromatog - OPLC Fázisrendszer halmazállapota Elválasztás mechanizmusa szerinti csoportosítás: - Megoszlásos krom. , - LLC (folyadék-folyadék krom. ), - Adszorpciós krom. , - LSC (folyadék-szilárd krom. ) - Ionpár kromatográfia (IPC), - Ioncsere kromatográfia (IEC), - Gélkromatográfia (GPC v. EC), - Affintitás kromatográfia

Adszorpciós kromatográfia Synder-féle kompetitív model VS – egységnyi tömegű adszorbens által megkötött mozgófázis térfog ’ – adszorbens aktivitási koefficiense Soi – komponens megkötődő képesség o. M – oldószer erősség, Ai – komponens adszorpciós felületigé Adszorbensek apoláris: aktív szén, polimer savas: szilikagél poláris bázikus: -Al 2 O 3

Oldószererősség Oldószer Hexán 2 -klórpropán Diklórmetán Acetonitril Metanol o(Si. O 2) 0. 0 0. 224 0. 326 0. 5 0. 735 o(Al 2 O 3) 0. 0 0. 29 0. 42 0. 65 0. 95

Megoszlásos folyadék-kromatográfia vi – a kompones móltérfogata - oldhatósági (Hildebrandt) param Hordozó: diatomaföld, szlilikagél, polimer Állófázis: pl. : Carbowax 400, - oxidipropionitril, stb. Eluens: apoláris szerves oldószerek, alkoholok, víz, stb. Kémiailag kötött folyadék állófázisok (BPC)

Állófázis: RP-C 18 1 – benzilalkohol, 2 – fenol, 3 – 3 -fenilpropanol, 4 – 2, 4 -dimetilfenol, 5 – benzol, 6 – dietil-o-ftalát

Ionpár kromatográfia Fordított fázisú (RP) fázisrendszerben a gyenge savak és bázisok visszat haladnak át az oszlopon. Retenció előidézése lehetséges ionpár képzéss

Retenciót befolyásoló járulékos tényezők: - Ionpárképző koncentrációja, - Eluens p. H.

Ioncsere kromatográfia

El – ellenion (H+ ; OH-, HCO 3 - )

Ionok kromatográfiás elválasztása Álófázis: Kationcserélő gyanta Szupresszor: Anioncserélő gyanta Állófázis: Anioncserélő gyanta Szupresszor: Kationcserélő gyanta

Gélkromatográfia (Kizárásos kromatográfia) Elválasztás: a komponensek molekulamérete alapján. Állófázis: porózus szilárd anyag. VR – bruttó retenciós térfogat, V 0 – áramlással átöblíthető ürestérfogat, VS – pórustérfogat. A pórusokba behatolni nem képes nagym komponensek esetében VR = V 0. Így K = 0. Kis méretű, az összes pórusba behatoló k ponensek esetében VR = V 0 + VS. Így K =1. Minél nagyobb a komponens mére annál kisebb mértékű a retenciója

Gélkromatográfiás elválasztás

Affinitás kromatográfia Y – térspecifikus (kulcs-zár) komplex k zésre képes, állófázis mátrixhoz kö makromolekula (antitest, fehérje, s Szelektív komplexképzés Az oszlop csak a komplexet kép szubsztrátot tatja vissza.

HPLC berendezés felépítése

HPLC berendezés Gynkotek M 480 gradiens pumpa : 0. 1 – 10 ml/min (0. 01 ml/min) Rheodyne 8125 injektor (20 ml) TOSOH TSK 6040 UV detektor: 200 – 700 nm (1 nm) Thermo Separation Products Refracto. Monitor IV (RI detektor)

Folyadék-kromatográfiás pumpák

Injektor

UV-detektor

RI-detektor

BIONISIS OPLC 50