Fixao para microscopia eletrnica LEONEL ALVES DE OLIVEIRA

Fixação para microscopia eletrônica LEONEL ALVES DE OLIVEIRA MARCELLA MOTTA DA COSTA

� Conceito: processo através do qual se obtém estabilização das estruturas celulares e intercelulares “in vivo”. � Métodos: � Físicos; � Químicos;

Fixação Física � Secagem ao ar - desarranjos/dismorfias das estruturas celulares; � Criofixação: � Congelamento rápido/super rápido tecido/células; � � cristais de gelo danos ao Congelamento lento - ideal para não formação dos cristais de gelo; Criopreservadores - substâncias que protegem as células da formação dos cristais e outros possíveis danos às células/tecidos DMSO e Glicerol;

� Criofixação convencional: � Inicialmente há uma fixação química com paraformaldeído, glutaraldeído , envolto em glicerol e posteriormente imerso em nitrogênio líquido; � Criofixação por congelamento ultra-rápido: � É obtido com o emprego de hélio líquido (-271ºC).

Fixação Química � Objetivos: � Preservar e estabilizar estruturas como na condição “in vivo”; � Manutenção da relação espacial entre organelas e moléculas; � Minimizar alterações na reatividade enzimática - Preservar e proteger; � Estabelecer ligação cruzada (amarração) entre moléculas do fixante e as tissulares (Fixadores Aditivos);

Paraformaldeído � Importante por sua interação/fixação das proteínas do tecido; � � Vantagens: � Não promove distorção celular � Atividades enzimáticas e propriedades imunogênicas são menos prejudicadas; Desvantagem: � Piores fixadores para lipídeos torna os ácidos graxos mais solúveis;

Glutaraldeído � É um monômero � Agentes de ligação cruzada de proteína mais fortes do que o formaldeído; � Vantagens: � Penetração lenta no tecido; � Preserva melhor a estrutura das cadeias polipeptídicas promove pouca distorção;

Karnovisky � Conjugação do paraformaldeído e glutaraldeído; � Vantagens: � Maior eficiência de penetração no tecido;

Fixação Química � Principais: � Paraformaldeído; � Glutaraldeído; � Formaldeído: Contra-indicado: � Karnovisky Penetração muito rápida, Contém metanol, mal fixador de lipídios

Controle de Qualidade � Concentração � Temperatura � p. H � Osmolaridade

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