FERTILISASI IN VITRO Sri Wahjuningsih Fakultas Peternakan UNIBRAW

Fertilisasi Adalah proses peleburan antara 2 sel gamet (oosit dan spermatozoa) untuk membentuk sel tunggal yang disebut zigot Fertilisasi ada 2 w Fertilisasi invitro w Fertilisasi In vivo

Proses Fertilisasi (Hinsch et al, 1994) • Kontak dan pengenalan antara spermatozoa dan ovum • Regulasi masuknya spermatozoa ke ovum • Fusi materi genetik spermatozoa – ovum • aktivasi metabolisme zigot untuk mengawali perkembangan

Deskripsi Proses Fertilisasi (Parrish & First, 1993) u u u u u Menempelnya spermatozoa ke Zona Pelucida Binding Zona Pellucida Reaksi Akrosom dan Penetrasi ke Zona Pelucida Fusi Membran plasma oosit dan spermatozoa Aktivasi oosit untuk meiosis II Reaksi Kortikal granul untuk memblok polispermia Reaksi Zona ( hardening Zona Swelling kepala spermatozoa Dekondensasi kromatin spermatozoa - oosit Singami dari 2 pronuklei

Proses Fertilisasi

Tahapan Fertilisasi In Vitro u Koleksi oosit dari ovary u In Vitro Maturation (IVM) u Kapasitasi Spermatozoa u In Vitro Fertilisation (IVF) u In Vitro Culture (IVC)

Koleksi oosit dari ovary Ada dua cara : 1. Donor hidup dengan ovum pick up 2. Rumah Potong Hewan Metode : 1. Aspirasi 2. Slicing 3. Pengambilan tiap folikel

Ovaries collected from abattoir

In Vitro Maturasi Pematangan oosit secara in vitro Medium : 1. Medium Kultur 2. Serum (Fetal Bovine Serum) 3. Antibiotik 4. Hormon ( FSH+ LH) atau (PMSG + h. CG) - Inkubasi dalam incubator 5% CO 2 selama 24 jam l

a b

Polar Bodi Oosit Setelah Maturasi In Vitro Selama 24 Jam

a b c d a. Oosit tahap GV c. Oosit tahap M I b. Oosit tahap GVBD d. Oosit tahap M II

Proses IVM Medium pencuci oosit Medium IVM = Parafin Oil Ekspansi kumulus Evaluasi IVM Transformasi inti oosit Proses IVF BO heparin Evaluasi penetrasi sperma : BO heparin -Oosit terpenetrasi -Polispermia

Definisi kapasitasi • Serangkaian proses yang melibatkan modifikasi dari fungsi biokimia dan biofisika yang membuat ejakulat mampu memfertilisasi oosit (Baldi et al. , 2000).

KAPASITASI • Proses spermatozoa menjadi fertil • Terjadi didalam saluran kelamin betina (in vivo) • Terpisah dengan seminal plasma (secara in vitro dilakukan pencucian) • Spermatozoa setelah kapasitasi memungkinkan untuk memfertilisasi sel telur

Perubahan selama kapasitasi • modifikasi Ca intraseluler dan ion lain • perubahan distribusi dan komposisi : lipid dan fosfolipid fluiditas, merubah struktur dan komposisi membran perubahan rasio kolesterol dan fosfolipid permiabilitas membran terhadap Ca 2+, HCO 3 -, K+

REAKSI AKROSOM • Fusi 2 membran antara plasma membran spermatozoa dengan membran akrosom bagian luar • Keluarnya akrosin Memungkinkan spermatozoa melakukan penetrasi pada zona • Tampak segmen bagian equator untuk fusi dengan sel telur.

• Proses pelepasan bahan-bahan pelapis membran spermatozoa secara bertahap, terutama pada bagian akrosom reseptor spermatozoa dpt berinteraksi dgn reseptor oosit (ZP)

Kapasitasi spermatozoa l l l Medium kapasitasi ( BO Cafein ) Sentrifugasi 1500 Rpm ( 1 kali atau 2 kali) Buang supernatannya

In Vitro Fertilisasi Oosit setelah metafase II ( mature) dipertemukan dengan spermatozoa setelah dikapasitasi pada medium fertilisasi (BO Heparin) diinkubasi dalam inkubator CO 2 5% selama 4 – 8 jam.

Keterangan a : Oosit terpenetrasi b : Sekelompok sel spermatozoa

Keterangan a : Oosit terpenetrasi b : Sel – sel kumulus terdestruksi oleh spermatozoa c : Sekelompok sel spermatozoa

In Vitro Culture u Setelah proses fertilisasi, oosit dimasukkan ke medium kultur. u Medium : 1. Medium kultur u 2. Serum (FBS) u 3. Antibiotik Inkubasi dalam inkubator C 0 2 selama 24 jam kemudian amati pembelahannya.

Embrio Tahap 2 sel

Embrio Tahap 4 sel

Embrio Tahap Morulla