Familia Enterobacteriaceae LP 1 Familia Enterobacteriaceae Manualul de

Familia Enterobacteriaceae LP 1

Familia Enterobacteriaceae Manualul de Bacteriologie sistematica Bergey (editia III / 2004) n Reuneste in prezent 44 genuri, dintre care 25 au fost implicate semnificativ in patologia umana n

Familia Enterobacteriaceae Genul Numar de specii Specii cu importanta medicala I. ESCHERICHIA 7 E. coli, E. fergusonii, E. hermanii, E. vulneris C. freundii, C. amalonaticus, C. diversus E. cloacae, E. aerogenes, E. agglomerans, E. sakazakii H. alvei X. CITROBACTER 12 XII. 16 ENTEROBACTER XV. HAFNIA 1

Familia Enterobacteriaceae Genul Numar de specii Specii cu importanta medicala XXI. MORGANELLA 1 M. morganii XXIX. PROTEUS 8 P. vulgaris, P. mirabilis, P. penneri XXX. PROVIDENCIA 6 P. alcalifaciens, P. rettgeri, P. stuartii

Familia Enterobacteriaceae Genul Numar de specii Specii cu importanta medicala XXXIV. SALMONELLA 8 XXXVI. SERRATIA XXXVII. SHIGELLA 12 XLIII. YERSINIA 12 S. enterica, S. choleraesuis, S. arizonae, S. enteritidis, S. paratyphi, S. typhimurium S. marcescens, S. liquefaciens S. dysenteriae, S. boydii, S. flexneri, S. sonnei Y. pestis, Y. 4

Caractere morfo-tinctoriale: • Bacili Gram-negativ • Mobili prin flageli peritrichi / imobili • Unii au capsulă: genul Klebsiella (K. pneumoniae) • Nu formează endospori (nesporulati)

Caractere de cultură: • • • Aerob - facultativ anaerobe Nepretentiosi nutritiv – cresc pe medii cu peptona in prezenta bilei Fermenteaza glucoza Oxidazo – (-) Produc catalaza Reduc nitratii la nitriti

Caractere de cultură: • • Tulbură uniform mediul de cultură lichid Colonii tip S, dar si R Uneori, colonii mucoase (tip M): Klebsiella pneumoniae Medii selective, majoritatea au lactoză: • • • Drigalski, Levin, Mac. Conkey, Leifson (ADCL), Istrate-Meitert, Hektoen, SS, Wilson - Blair

Mediul Levin (EMB) Categoria: Mediu slab selectiv si diferenţial n Contine: Eozina Y si albastru de metilen, care inhiba bacteriile Gram (+) n Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E. coli) n

Mediul ADCL (Leifson) n n Categoria: Mediu moderat - selectiv si diferenţial Contine: agar – dezoxicholat – citrat – lactoza Inhiba bacteriile Gram (+) si o parte din bacteriile Gram (-) Utilizare: cultivarea shigellelor si salmonellelor, Yersiniei

Familia Enterobacteriaceae Categoria Gruparea taxonomica Semnificatia etiologica I. Patogene Salmonella, Shigella – Escherichia (fenotipuri diareigene si uropatogene de E. coli), Yersinia certa II. Conditionat patogene Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia Izolate semnificativ in prelevate necontaminate (LCR, prelevate din cavitati inchise, hemoculturi, colectii neabcedate III. Ocazional - patogene Cedecea, Hafnia, Kluyvera, Pantoea, Tatumella, Yokenella

Genul Shigella q patogen intestinal Caracteristicile speciilor de Shigella: n imobile n nu fermentează lactoza pe mediile cu lactoza – lactozo (-) n determină dizenterie bacilară – boala specific umana: • • • febră, colici abdominale, scaune diareice muco - sangvinolente

Clasificarea Shigella In functie de antigenul somatic O: • Shigella dysenteriae: 13 tipuri: 1 – S. shigae, 2 – S. schmitzii, 3 – 7 S. Large Sachs, 8 – 13 • Shigella flexneri: 6 tipuri (1 – 6), 10 subtipuri (1 a, 1 b, 2 a, 2 b, …, 5 a, 5 b), 2 variante (x, y) • Shigella boydii: 18 tipuri (1 – 18) • Shigella sonnei (2 tipuri: S, R)

Recoltarea produselor patologice n n Produs patologic: Materii fecale (emisie spontana, sondaj recto – sigmoidian cu sonda Nélaton cât mai aproape de debutul bolii inaintea instituirii tratamentului antimicrobian Coprorecoltor steril cu mediu de transport: Cary - Blair

Examenul microscopic din produs patologic - oferă informatii importante pentru diagnosticul diferential al enterocolitei preparatul nativ între lamă si lamelă → polimorfonucleare, eritrocite poate evidentia chiste sau trofozoiti de Entamoeba histolytica (exclude dizenteria bacilara)

Coprocultura Izolarea: - Medii de cultură selective si diferentiale pentru enterobacterii: * Drigalski * Levin * Mac. Conkey * Leifson (ADCL) * Istrate-Meitert * Hektoen

Caractere morfo-tinctoriale Bacili Gram-negativ

Proprietăţi de cultură Colonii S sau R n Lactozo - negative n

Identificarea preliminara caracteristicile biochimice: TSI, MIU, MILF, Citrat: lactozo (-), nu produce gaz din fermentarea glucozei, nu produce H 2 S, imobil, ureaza (-), indol (+/-), lizindecarboxilaza (-), fenilalanindezaminaza (-), citrat (-). n caracteristicile antigenice (tiparea serologica): permit clasificarea de grup, de tip (ex. : S. disenteriae, S. flexneri etc. ). n

Patogenie n n n Shigella este agentul dizenteriei bacilare (shigelloză) Ag. de suprafata permit atasarea non – receptor specifica, modificarea citoscheletului, endocitarea bacteriei, apoi diseminarea in submucoasa unde produc necroze – patogenitate de tip invaziv. Exotoxinele – sunt, de asemenea implicate (ex. : toxina Shiga, produsa de S. dysenteriae blocheaza sinteza proteica, prin efect citotoxic asupra endoteliului capilar determina complicatiile vasculare si producerea Sdr. hemolitic – uremic din shigeloze).

Manifestări clinice n se manifestă prin: colici abdominale severe, varsături, tenesme si scaune caracteristice muco - sanguinolente. n rareori, caracter invaziv n complicatii extraintestinale: tulburari neurologice, sdr. hemolitic – uremic, artrita reactiva. Aparitia lor depinde de virulenta tulpinilor.

Epidemiologie: Shigella este un patogen specific uman n se transmite pe cale fecal - orală, asociata intotdeauna cu un nivel igienico – sanitar scazut n insectele (mustele) sporesc potentialul epidemigen estival n transmisia hidrica este importanta n dezastrele naturale si razboaiele au fost frecvent asociate cu izbucniri epidemice de dizenterie. n

Teste de patogenitate Testul Sérèny (testul keratoconjunctivitei): - poate confirma caracterul de invazivitate al Shigellelor izolate; - acest test nu se foloseste în mod uzual. - o picătură cu Shigelle invazive izolate depusă în corneea unui cobai (porc de Guineea), va produce keratoconjunctivite severe în câteva zile, prin invazie la cornee, care se vindecă complet în 2 - 3 săptămâni.

Tratament n se face în functie de sensibilitatea la antibiotice, conform antibiogramei difuzimetrice Kirby – Bauer, efectuata dupa standardul CLSI.

Genul Salmonella peste 2200 serotipuri Infecţii (salmoneloze): • Febra tifoidă – S. typhi Febra paratifoidă – S. paratyphi A, B Toxiinfecţii alimentare şi enterite (copii) • Stări septico - piemice • • S. typhymurium S. enteritidis S. paratyphi B S. panama S. paratyphi C S. choleraesuis

Caractere generale: • bacili Gram – negativ • mobili (flageli peritrichi) • lactozo – negativi • identificarea antigenelor O, H, Vi → reacţii de aglutinare

Salmoneloze majore n n n febra tifoidă si paratifoidă determinate de bacilul tific si paratific - afectează exclusiv omul, omul si animalele sunt responsabile de poluarea solului, a apelor reziduale, apelor de suprafata, in care pot supravietui luni si chiar ani (in sol) se transmit pe cale fecal - orală, apă contaminată, intensificarea comertului si a calatoriilor la mari distante, migratiile populationale, industrializarea alimentatiei si a cresterii animalelor de consum (porci, pasari) in mari colectivitati consumatoare de hrana cu adaosuri proteice deseori contaminate (fainuri furajere de carne, oase, sange) au contribuit esential la raspandirea larga a serovarurilor si totodata la cresterea morbiditatii prin salmoneloze. factori sezonieri si clima calda favorizeza, in conditii precare de igiena, nivelul morbiditatii

Manifestari clinice Febra tifoida n S 1: letargie, febră, dureri, constipatie; n S 2: febră mare, abdomen dureros, rozeole tifice, diaree, hepatosplenomegalie.

Salmoneloze minore n n n au o incidentă crescută în ultimul timp, manifestându-se prin toxiinfectii alimentare I loc in etiologia toxiinfectiilor alimentare Cauze: ingerarea de carne, lapte, ouă infestate cu specii de Salmonelle: S. typhimurium, S. anatum, S. enteritidis.

TABLOU CLINIC Simptomele (Dg. diferential cu infectiile alimentare stafilococice) sunt: • incubatie mai lungă de 12 – 48 de ore, • febră, • sindrom diareic • stari septico - piemice

Recoltarea produselor patologice Febre tifo – paratifoide: n n S 1: hemocultură S 2: urocultură, coprocultură Gastroenterite: n n n coprocultură lichid de vărsătură alimente

Examenul microscopic din produs patologic Nu oferă informatii relevante!

Coprocultura Izolarea: - Medii de imbogătire: - - Bulion cu selenit acid de sodiu Medii moderat – selective, inalt - selective si diferentiale: - Leifson (ADCL) Istrate-Meitert SS Hektoen Wilson - Blair

Caractere morfo-tinctoriale Bacili Gram negativ

Proprietati de cultura Colonii S

Proprietati de cultura Mediul Drigalski Colonii lactozo - negative

Proprietati de cultura Lactozo - negativ Mediul Levin

Proprietati de cultura Agar Mac Conkey

Identificarea se bazează pe: n caracteristicile morfologice: bacili gram - negativi, mobili n caracteristicile de cultură: colonii S, lactozo – negative, transparente sau in culoarea mediului, cu centrul negru (“ochi de pisica”) n caracteristicile biochimice: Lactoza (-), H 2 S (+), produc gaz in cantitate mica sau deloc din fermentarea glucozei, mobile, ureaza – (-), Indol (-), lizindecarboxilaza (+), fenilalanindezaminaza(-), Citrat (+), rosu-metil (+).

Diagnostic serologic indirect reacţia Widal Sunt colectate 2 probe de sânge în prima si a – 3 – a săptămână de boala. n se identifică anticorpii specifici anti - S. typhi, S. paratyphi A si B in serul pacientilor, separat pentru antigenul O (somatic) si H (flagelar) – prin reactii de aglutinare directa in tuburi. n se stabileste dinamica titrului de ac. anti – O si anti – H. n

Tratament n n în functie de testul de sensibilitate la antibiotice (antibiograma difuzimetrica Kirby – Bauer, conform standardelor CLSI). este recomandat: Cloramfenicolul. Ampicilina si Trimethoprim -sulfamethoxazolul sunt alternative cu efecte secundare mai puţin severe. in ultima vreme, se descriu tot mai mult tulpini de Salmonella spp. cu fenotipuri de rezistenta de tip ESBL!

Tema pentru studenti Cautati pe net imagini cu culturi de Enterobacterii (Salmonella, Shigella). n Incercati sa descrieti caracterele de cultura particulare, metodele de identificare biochimica si antigenica pentru fiecare gen descris in aceasta lucrare. n Desenati in caietul de lucrari practice coloniile si algoritmul de identificare! n Tema va fi evaluata si punctata! n